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作者：张贵君;汪瑶;李军令;马骏;王彦春;
单位：湖北中医药大学针灸骨伤学院;湖北中医药大学中医临床学院;
摘要：目的：观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病（PD）小鼠中脑黑质沉默调节蛋白3(SIRT3及其下游PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)、PARK2基因编码蛋白（Parkin）介导的线粒体自噬的影响，探讨电针治疗PD的可能机制。方法：C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组、假电针组，每组12只。采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶复制PD小鼠模型。电针组小鼠给予针刺“风府”“太冲”“足三里”，每天1次，每次20 min，连续12 d。以旷场实验评估各组小鼠的运动能力；免疫组织化学法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、α-突触核蛋白（α-syn）阳性表达；透射电镜观察黑质区神经元超微结构；免疫荧光染色法检测小鼠黑质自噬轻链蛋白3(LC3)的阳性表达；实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin和线粒体自噬受体蛋白P62、Beclin-1、LC3ⅡmRNA表达水平；Westernblot法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin、P62、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平。结果：与对照组比较，模型组小鼠运动总距离、运动总时间、运动速度和进入中央区域的次数均下降（P<0.01）;TH、LC3阳性表达减少（P<0.01）,α-syn阳性表达增加（P<0.01）；部分线粒体肿胀，线粒体嵴断裂减少，溶酶体数量减少；中脑黑质TH、SIRT3、PINK1、Parkin、Beclin-1、LC3ⅡmRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01）,α-syn和P62 mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组比较，电针组小鼠运动总距离、运动总时间、运动速度和进入中央区域的次数增加（P<0.01,P<0.05）,TH、LC3阳性表达增加（P<0.01,P<0.05）,α-syn阳性表达减少（P<0.01），线粒体数量增多，出现自噬小体，肿胀减轻，中脑黑质TH、SIRT3、PINK1、Parkin、Beclin-1、LC3ⅡmRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）,α-syn、P62mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01）；假电针组运动总距离、总时间增加（P<0.05）,TH阳性表达增加（P<0.05）,α-syn阳性表达减少（P<0.05），部分线粒体肿胀，未见自噬体出现，TH、SIRT3、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）,P62 mRNA、α-syn mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01,P<0.05）,LC3ⅡmRNA表达水平升高（P<0.05）。与假电针组比较，电针组运动总时间延长（P<0.01）,α-syn阳性表达及mRNA表达水平下降（P<0.01,P<0.05）,TH、SIRT3、PINK1、Parkin mRNA及SIRT3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：电针“风府”“太冲”“足三里”可改善PD小鼠运动能力，其机制可能是通过激活SIRT3/PINK1/Parkin通路，增强线粒体自噬，促进PD小鼠中脑黑质TH表达，减少α-syn聚集，从而发挥神经保护作用。
关键词：帕金森病;;电针;;沉默调节蛋白3;;PTEN诱导的假定激酶1;;PARK2基因编码蛋白;;线粒体自噬
基金资助：国家自然科学基金项目（No.81473788）;; 教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目（No.NCET-10-0154）
