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作者：王琪;刘瑶瑶;侯子文;
单位：天津中医药大学第一附属医院;国家中医针灸临床医学研究中心;天津中医药大学;
摘要：目的：观察“醒脑开窍”针刺法对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠神经元铁死亡相关蛋白表达的影响，探讨针刺抑制CIRI大鼠神经元铁死亡的作用机制。方法：将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组和去铁胺（DFO）组，每组18只。采用线栓法制备CIRI大鼠模型，针刺组予针刺“水沟”“内关”“三阴交”，每日针刺2次，每次20 min，连续3 d。DFO组腹腔注射DFO注射液（0.1 g/kg），每日1次，连续3 d。采用Zausinger 6分法评估大鼠神经功能缺损程度；TTC法测定脑梗死体积百分比；HE染色观察脑组织形态结构；透射电子显微镜观察缺血侧海马组织神经元线粒体结构；普鲁士蓝染色观察脑组织铁沉积水平；流式细胞术检测缺血半暗带活性氧（ROS）含量，微板法检测缺血半暗带谷胱甘肽（GSH）含量，实时荧光定量PCR法检测缺血半暗带谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运体1 (DMT1)、转铁蛋白（TF）、转铁蛋白受体1(TFR1)、膜铁转运蛋白1 (FPN1)mRNA表达水平，Western blot法检测缺血半暗带GPX4、DMT1、TF、TFR1、FPN1及铁蛋白（FER）的蛋白表达水平。结果：与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分降低、脑梗死体积增大（P<0.01），脑组织病理损伤严重、铁沉积增多（P<0.01），线粒体呈典型铁死亡改变；GSH含量降低、ROS含量升高（P<0.01）,GPX4、FPN1 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.01）,TF、TFR1、DMT1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.01）,FER蛋白表达水平升高（P<0.01）。与模型组比较，DFO组和针刺组大鼠神经功能缺损评分升高（P<0.05），脑梗死体积减小（P<0.01），脑组织病理学和线粒体铁死亡改变减轻，铁沉积减少（P<0.01）;ROS含量降低、GSH含量升高（P<0.05,P<0.01）,DMT1、TF、TFR1 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）,FER蛋白表达水平降低（P<0.05）,GPX4、FPN1 mRNA和蛋白表达水平提高（P<0.01）。与DFO组比较，针刺组铁离子沉积面积和ROS含量更低、GPX4 mRNA和蛋白表达水平更高（P<0.01,<0.05）。结论：“醒脑开窍”针刺法对CIRI大鼠具有神经保护作用，其机制可能与调节缺血半暗带铁死亡相关靶点，调控铁代谢，抑制氧化应激损伤，抑制神经元铁死亡有关。
关键词：“醒脑开窍”针刺法;;脑缺血再灌注损伤;;铁死亡;;氧化应激
基金资助：国家自然科学基金青年项目（No.82104995）
