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作者：刘明珠;黄静;程远;韦云依;牟容丽;黄琳;竺利波;陆兰天;柯珂;陈嘉;余庆;李鹏飞;
单位：广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西科学院;中国-东盟现代渔业产业技术转移示范中心,广西科学院北部湾海洋产业研究院;南宁学院食品与质量工程学院;
摘要：【目的】利用核酸适体LYGV1c构建可快速、准确识别石斑鱼虹彩病毒（Grouper iridovirus Guangxi strain,SGIV-Gx）感染的酶联吸附法（Aptamer LYGV1c-based enzyme-linked apta-sorbent assay,LYGV1c-ELASA），为提高水产疫病检测及防控效率提供理论支持。【方法】基于生物素标记的LYGV1c(Bio-LYGV1c)开发核酸适体酶联吸附法（LYGV1c-ELASA）检测SGIV-Gx，通过对Bio-LYGV1c特异性、灵敏性、稳定性等实验评估其检测性能。通过珍珠龙胆石斑鱼（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）SGIV-Gx感染试验进行活体验证，同时用荧光定量PCR(qPCR)测定衣壳蛋白基因（MCP）的表达，与LYGV1c-ELASA进行比较，验证该酶联吸附法检测的可信度。【结果】LYGV1c-ELASA的方法可特异性地识别SGIV的感染，Bio-LYGV1c识别SGIV感染的最适工作浓度为500 nmol/L，最适孵育时间为20 min，最适结合温度为4～28℃，LYGV1c-ELASA最低检测限为5×103 mL-1。活体验证结果表明，随着注射的SGIV-Gx浓度的升高，LYGV1c-ELASA检测出的石斑鱼体内病毒450 nm处的光密度（OD450）的值升高；qPCR结果表明，SGIV-Gx的MCP的表达量升高，与LYGV1c-ELASA检测结果相一致。【结论】建立的LYGV1c-ELASA技术不仅可用于体外检测，同时也适用于活体检测。LYGV1c-ELASA技术可实现对石斑鱼养殖过程中石斑鱼虹彩病毒病的快速诊断、实时监控。
关键词：石斑鱼虹彩病毒;;检测;;核酸适体;;酶联吸附法
基金资助：国家自然科学基金（32373175）;; 广西自然科学基金（2023JJG130007,2022GXNSFBA035521,2022JJA130074）;; 国家重点研发计划（2022YFD2401200）;; 国家现代农业产业技术体系广西创新团队项目（nycytxgxcxtd-2021-08-02）
