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作者：张帅帅;刘明珠;黄静;师德强;陈嘉;柯珂;竺利波;韦云依;牟容丽;陆兰天;杨辉;余庆;李鹏飞;
单位：广西大学资源环境与材料学院;广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心;中国-东盟现代渔业产业技术转移示范中心,北部湾海洋产业研究院;南宁学院食品与质量工程学院;
摘要：【目的】利用可特异性识别大口黑鲈（Micropterus salmoides）虹彩病毒（Largemouth bass virus, LMBV）的核酸适体LBVA1建立药物高通量筛选技术（Aptamer LBVA1-based high-throughput screening, LBVA1-AHTS），以快速筛选有效抗LMBV药物。【方法】用探针FAM-LBVA1检测感染不同浓度[感染复数（MOI）分别为0、0.05、0.10、0.20]LMBV 48 h，以及感染LMBV 0、6、12、24和48 h的胖头鱥（Pimephales promelas）肌肉细胞（Fathead minnow cells, FHM）荧光值，并用激光共聚焦及荧光定量PCR(RT-qPCR)验证LMBV感染情况；将利巴韦林、阿昔洛韦、加巴喷丁、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯等9种药物分别以安全工作浓度与LMBV混匀，加入FHM细胞共孵育，运用探针FAM-LBVA1及RT-qPCR技术检测各组LMBV感染情况，比较两种方法检测的药物抗LMBV感染效果，筛选出有效抗LMBV药物。【结果】探针FAM-LBVA1检测及RT-qPCR技术验证结果均表明，在感染复数（MOI）为0.20、感染时间为48 h时，对LMBV感染的检测效果最佳。9种药物抗LMBV效果筛选结果表明，LBVA1-AHTS技术与RT-qPCR技术两种筛药方法筛选出利巴韦林、加巴喷丁、金刚烷胺、卡马西平、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯7种药物的抗病毒效果一致，其中茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯3种药物具有抗LMBV的效果，其余4种药物无明显抗病毒效果，两种方法一致率近80%。【结论】建立的LBVA1-AHTS模型可快速、准确、高效筛选出抗LMBV病毒药物，为快速筛选抗病毒药物提供理论和技术基础。
关键词：大口黑鲈虹彩病毒;;核酸适体;;高通量筛选;;抗病毒药物
基金资助：国家自然科学基金(32373175);; 广西自然科学基金(2023JJG130007,2022GXNSFBA035521,2022JJA130074);; 国家重点研发计划(2022YFD2401200);; 国家现代农业产业技术体系广西创新团队项目(nycytxgxcxtd-2021-08-02)
