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作者：刘笑蓉;李硕夫;刘湘丹;龙雨青;周日宝;
单位：湖南中医药大学药学院;湖南中医药大学第一附属医院;
摘要：目的:探讨异鼠李素对类风湿关节炎(RA)进展的影响及其机制。方法:采用牛II型胶原蛋白(CII)诱导胶原性关节炎(CIA)大鼠模型，采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)作为RA的细胞模型。以雷公藤多苷作为阳性对照药物，研究异鼠李素的作用及机制。根据关节红肿程度进行关节炎指数的评定；采用HE染色观察大鼠滑膜组织病理形态。CCK-8法检测细胞活力；Transwell法检测细胞迁移；ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)的含量；qRT-PCR法检测细胞基质金属蛋白酶2(Mmp2)、Mmp3、Mmp8、Mmp9、P38、蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素靶蛋白(Mtor)、P65的mRNA表达；Western blot法检测滑膜组织细胞P38、AKT、mTOR、P65的磷酸化表达。结果:动物实验显示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠足关节出现明显的肿胀，关节炎指数显著升高(P<0.01),滑膜组织可见炎症细胞大量浸润，且出现滑膜增生，滑膜组织中P38、AKT、mTOR和P65的磷酸化表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较，雷公藤多苷9 mg/kg组和异鼠李素20 mg/kg组大鼠足关节肿胀程度明显减轻，关节炎评分显著下降(P<0.01),滑膜组织炎症细胞浸润和增生症状明显改善，P38、AKT、mTOR和P65的磷酸化表达显著下调(P<0.01)。细胞实验显示，与空白对照组比较，模型对照组RA-FLS增殖活性和迁移能力明显增强(P<0.05或P<0.01),细胞上清液中IL-1β、IL-6、MCP-1和MIP-1α的含量显著升高(P<0.01),IL-10含量显著降低(P<0.01),细胞中Mmp2、Mmp3、Mmp8和Mmp9的mRNA表达显著上调(P<0.01),P38、Akt、Mtor和P65的mRNA表达和P38、AKT、mTOR、P65的磷酸化表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较，雷公藤多苷0.03 mg/mL组和异鼠李素0.094、0.188、0.375 mmol/L组RA-FLS的增殖活性和迁移能力明显降低(P<0.05或P<0.01),雷公藤多苷0.03 mg/mL组和异鼠李素0.375 mmol/L组RA-FLS中IL-1β、IL-6、MCP-1和MIP-1α的含量显著降低(P<0.01),IL-10的含量显著升高(P<0.01),Mmp2、Mmp3、Mmp8和Mmp9表达显著下调(P<0.01),P38、Akt、Mtor和P65的mRNA表达和P38、AKT、mTOR、P65的磷酸化表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:异鼠李素能抑制RA-FLS增殖、迁移以及炎症因子等的变化，从而缓解CIA大鼠的RA症状，作用涉及P38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)和AKT/MTOR信号通路的调节。
关键词：异鼠李素;;类风湿关节炎;;P38丝裂原活化蛋白激酶;;蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白;;增殖和迁移
基金资助：湖南省自然科学基金项目(编号：2022JJ80086、2023JJ60342);; 湖南省卫健委科学研究项目(编号：D202302078705);; 湖南省教育厅科学研究项目(编号：23B0385);; 湖南省大学生创新创业训练计划项目(编号：2022-5313);; 湖南省中医药管理局科研计划项目编号：(A2024002、B2023150);; 湖南中医药大学2023本科生科研创新基金项目编号：(校行科字[2023]7);; 湖南中医药大学校级科研项目编号：(2023-27);湖南中医药大学青
