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作者：李小芳;王文斌;莫静;程华春;谢云;汪波;
单位：湖北省药品监督检验研究院;湖北中医药大学;湖北大学;国家药品监督管理局中药质量控制重点实验室;
摘要：目的：利用MLPA技术结合熔解曲线法建立一种能鉴别山药及其常见混伪品的新方法。方法：以山药、参薯、木薯、番薯为研究对象，针对四个物种的matK序列分别设计MLPA特异性探针，通过DNA变性、杂交、连接、扩增及熔解反应等步骤，建立MLPA-熔解曲线鉴别体系，利用各样品熔解曲线中特异性峰(Tm值)的差异实现不同物种的鉴定。结果：27份样品中，山药Tm值为78.3℃,参薯Tm值为79.9℃,木薯Tm值为81.2℃,番薯Tm值为82.9℃,且相互之间没有交叉干扰。该法对山药、参薯、木薯、番薯各自单独的最低检测限为0.1 ng/μL;对相互混淆掺伪的最低有效检出率为5%。27份样品的检测结果均与测序结果一致。结论：MLPA技术结合熔解曲线法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点，具有进一步推广应用的潜力。
关键词：山药;;多重连接探针扩增技术;;熔解曲线;;matK;;鉴别
基金资助：湖北省青年拔尖人才培养计划(2021年);; 湖北中药质控标准物质研制及技术平台的建立(2020ACA007);; 中国食品药品检定研究院项目(TCM2021-YJ11)
