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作者：罗金;张高峰;崔晶晶;柳志成;赵帅阳;任巧云;胡东生;曹立华;常国勤;殷宏;罗建勋;刘光远;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;甘肃农业大学动物科学技术学院;庄浪县畜牧兽医中心;高台县动物疫病预防控制中心;高台县新坝镇畜牧兽医工作站;高台县南华镇畜牧兽医工作站;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州大学;
摘要：本试验以天冬氨酸蛋白酶（AP）为目标基因，探究其表达抑制后对卵形巴贝斯虫侵染长角血蜱的能力。利用5′/3′-RACE和PCR扩增天冬氨酸蛋白酶基因的全长和CDS，然后根据获得的序列设计siRNA干扰引物。通过颈静脉接种卵形巴贝斯虫的方式构建动物感染模型，将通过RNA干扰（RNAi）AP基因表达后的长角血蜱置于感染卵形巴贝斯虫牛体表，使蜱叮咬后检测蜱及蜱卵中卵形巴贝斯虫的感染率。结果显示，长角血蜱AP基因全长为1 497 bp，编码区序列为1 176 bp。该基因的RNAi可使AP的表达丰度降低81.91%(P=0.003<0.01)具有显著性差异。感染动物过程中，相较于空白对照组和阴性对照组，qRT-PCR结果表明RNAi组的巴贝斯虫感染率下降。试验结果表明，干扰长角血蜱AP能有效抑制卵形巴贝斯虫的垂直传播，虽然该基因在蜱种间有较高保守性，但是其核酸序列仍然存在一定的差异。该基因第626～644位或第257～275位定点结合可作为潜在的阻断卵形巴贝斯虫传播的疫苗设计靶点，该位点可以发挥抑制/干扰AP表达的作用。该作用下可有效阻止卵形巴贝斯虫的垂直传播，而且可导致巴贝斯虫的感染水平的显著降低。因此，本研究不仅有助于揭示巴贝斯虫的生物学特性，也为疾病防控提供了潜在的新策略，为公共卫生提供更加有效的干预措施。
关键词：长角血蜱;;卵形巴贝斯虫;;天冬氨酸蛋白酶;;RNA干扰;;RACE
基金资助：中国农业科学院科技创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI);; 国家肉牛牦牛产业技术体系项目（CARS-37）;; 国家寄生虫资源库项目(NPRC-2019-194-30)
