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作者：罗梦;郭子强;李佳乐;帅文娜;李丽薇;周艳君;姜一峰;童武;童光志;丛雁方;韦祖樟;高飞;
单位：广西大学动物科学技术学院;中国农业科学院上海兽医研究所;扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;青岛动保国家工程技术研究中心有限公司;上海市兽医生物技术重点实验室;
摘要：为深入研究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）的编码基因B602L，本研究根据ASFV-SY18株的B602L基因序列（MH766894.3），设计引物合成1 593 bp的B602L基因全长序列，构建pCold-TFB602L原核表达质粒。将鉴定正确的原核表达质粒转化感受态细胞，用IPTG诱导表达重组蛋白B602L并通过SDS-PAGE进行验证和分析。用纯化后的pB602L蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，测定抗体效价并经Westernblot鉴定其特异性。同时基于本实验室前期研究，构建表达B602L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）全长感染性克隆。本研究将ASFV B602L基因全长序列插入PRRSVORF1b和ORF2a之间，转染全长感染性克隆质粒后拯救获得重组病毒rPRRSV-B602L，并对其进行病毒学特性分析。利用制备的多克隆抗体与重组病毒和真核细胞表达的蛋白进行Western-blot和IFA验证。结果显示，成功构建pCold-TF-B602L原核表达质粒，诱导表达的重组蛋白pB602L可与His标签单抗和制备的抗pB602L抗体产生特异性反应，其效价为1∶16000；成功构建并拯救出重组病毒rPRRSV-B602L，它与亲本病毒具有相似的病毒学特性。本研究拯救的重组病毒可以稳定表达pB602L蛋白，该抗pB602L多克隆抗体能够特异性识别重组病毒表达的蛋白和真核细胞表达的蛋白，具有良好的特异性和反应原性，为进一步探索pB602L蛋白的功能及研制表达ASFV特异性抗原蛋白的重组PRRSV活载体疫苗提供一定的研究基础。
关键词：非洲猪瘟病毒;;pB602L蛋白;;多克隆抗体;;病毒活载体
基金资助：国家重点研发计划项目（2022YFD1800800,2021YFD1801401）;; 上海市自然基金项目（21ZR1476900）;; 国家自然科学基金项目（32373050,32072861）;; 中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-CSLPDCP-202402）;; 上海市兽医生物技术重点实验室开放基金项目（BD1500010）;; 山东省科技型中小企业创新能力提升工程项目（2022TSGC1142）
