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作者：刘潇;蔺晓忠;严欢;李敏;李仙月;朱映新;杨雪;何清;钟丽君;余谦;田丽梅;杜平;
单位：华宇生物科技(腾冲)有限公司;华派生物技术(集团)股份有限公司;
摘要：为确定十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB）对大肠杆菌发酵菌泥重悬液的澄清效果及口蹄疫病毒样颗粒（foot-and-mouth disease virus-like particles,FMD VLPs）组装的影响，通过在破碎后的FMDV结构蛋白大肠杆菌发酵重悬液中加入CTAB，用核酸电泳和鲎试剂显色法分别检测DNA及内毒素含量的变化，确定CTAB对发酵菌泥重悬液的澄清效果，然后经His亲和层析凝胶法纯化目标蛋白，并将纯化蛋白在无细胞体系内组装成FMD VLPs，利用蔗糖密度梯度超速离心结合高效液相分析法对FMD VLPs进行定量分析。结果表明，加入CTAB，均质离心后上清中宿主DNA含量明显减少（P<0.01），纯化后收获目的蛋白浓度未出现明显变化（P>0.05），但收获蛋白的内毒素含量明显上升（P<0.01），重悬液上清及纯化蛋白Zeta电位绝对值明显降低（P<0.05），且FMD VLPs的组装量显著减少（P<0.05）。CTAB在一定盐浓度溶液中能够沉淀DNA，利于宿主DNA的去除，但同时会改变目标蛋白的带电属性，增强目标蛋白与内毒素的结合，并降低组装体系的稳定性，致使FMD VLPs的组装率显著下降。
关键词：CTAB;;FMDV结构蛋白;;DNA;;内毒素;;VLPs
基金资助：中央引导地方科技发展资金项目（202207AC110015）;; 云南省生物医药重大科技专项（202302AA310023）;; 云南省创新引导与科技型企业培育计划项目（202304AP080110）;; 云南省科技人才与平台计划项目（202405AC350099）
