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作者:张丹;连佳欢;冯倩倩;
单位:清华大学生命科学学院;清华大学生物医学测试中心;
摘要:为探索表达内源性荧光蛋白小鼠组织的最佳透明化方案,分析了6种组织透明化方法 CLARITY、CUBIC、FRUIT、3DISCO、uDISCO、PEGASOS对小鼠全脑透明程度、内源荧光保留强度、神经元胞体计数和透明后小鼠全脑体积等可视化参数的影响。结果显示,CLARITY方法处理后小鼠全脑透明化程度最高,内源荧光保留强度和神经元胞体计数最佳,但全脑体积膨胀,选择成像设备时需满足一定的尺寸要求。CUBIC和FRUIT方法透明化程度较差,内源荧光保留强度和神经元胞体计数较弱,但全脑体积基本不变,成本和技术门槛低,适合初学者。3DISCO、uDISCO和PEGASOS方法透明化程度高,全脑体积有明显缩小,增加了选择成像设备的自由度,但3DISCO和uDISCO方法内源荧光保留强度较弱,神经元胞体计数较少,不太适合表达内源性荧光蛋白的小鼠组织。PEGASOS方法处理的小鼠全脑组织内源荧光保留强度和神经元胞体计数表现优异,是小鼠全脑可视化和表达内源性荧光蛋白小鼠组织透明化的优选方法。
关键词:组织透明化方法;;透明程度;;内源荧光保留强度;;神经元胞体计数;;全脑体积
基金资助:清华大学实验室创新基金(500-100006029,500-10130218)