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作者：王月;何国良;李兰玉;吴倩;周军媚;
单位：桂林医学院附属医院广西肝脏损伤与修复分子医学重点实验室;桂林医学院实验动物中心;桂林医学院临床医学院;桂林医学院中美健康与疾病脂质研究中心;桂林医学院附属医院广西神经鞘脂代谢相关疾病基础研究重点实验室;桂林医学院附属医院肝胆胰外科实验室;
摘要：目的 建立并鉴定跨膜蛋白121(Tmem121)肝细胞特异性基因敲除小鼠。方法 利用CRISPR/Cas9与Cre-loxp系统构建Tmem121~(flox/+)/Cre~+与Tmem121~(flox/flox)小鼠，再将两种小鼠进行杂交繁育获得后代小鼠。提取后代小鼠的鼠尾DNA，通过PCR鉴定小鼠基因型，获得肝细胞特异性Tmem121基因敲除小鼠(Tmem121~(flox/flox)/Cre~+,Tmem121~(ΔHep))。观察并分析敲除小鼠与对照小鼠的生长繁殖及器官发育情况。利用PCR及Western blot法验证Tmem121在小鼠原代肝细胞中敲除效率。利用Cell Mask~(TM)深红质膜染色法比较对照组小鼠与敲除组小鼠原代肝细胞的形态差异并进行统计学分析。结果 通过小鼠基因型鉴定，成功获得Tmem121~(flox/flox)/Cre~+小鼠。敲除小鼠与对照小鼠在体质量、繁殖能力及肝脏的生长发育方面均无明显差异。肝细胞特异性敲除Tmem121基因对肝组织形态结构及病理特征无明显影响。与对照组相比，敲除组小鼠原代肝细胞Tmem121在mRNA及蛋白水平均明显降低(P<0.01)。Cell Mask~(TM)深红质膜染色结果显示Tmem121敲除组小鼠的原代肝细胞的双核比例增多(P<0.05)，细胞表面积减小(P<0.001)。结论 成功建立Tmem121肝细胞特异性基因敲除小鼠模型，为进一步研究Tmem121基因在肝脏疾病中的作用及机制提供了动物模型支持。
关键词：跨膜蛋白121;;特异性敲除;;Cre/LoxP系统;;肝细胞;;基因型鉴定;;原代肝细胞分离
基金资助：国家自然科学基金项目(编号：82060124、82260529);; 广西科技厅中央引导地方科技发展资金项目(编号：桂科ZY21195024);; 大学生创新创业训练计划项目(编号：202210601005)~~
