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作者：白红枚;杨振;胡韦康;王子涵;周文静;何清雅;钟健;李名聪;刘莉;张朝阳;张素梅;张胜权;
单位：安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;安徽医科大学附属合肥医院(合肥市第二人民医院)病理科;安徽医科大学科研实验中心;
摘要：目的 探究羊毛固醇合成酶(LSS)基因功能缺失后对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型小鼠肠道功能的影响。方法 利用CRISPR/Cas9系统建立LSS全身杂合敲除C57小鼠(LSS~(+/-))模型，用60%脂肪比的高脂饲料喂养6个月后，通过HE和油红O染色检测肝脏组织内脂肪沉积情况; HE染色观察小肠组织的形态变化;试剂盒检测肠道组织中总胆固醇含量的变化;苯酚红糊体检测小鼠的胃肠动力功能; Evans blue染色检测肠道通透性; Western blot检测LSS、紧密连接蛋白(Claudin)-1、Claudin-5、白细胞分化抗原36(CD36)、尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)蛋白在小肠组织中的表达情况。结果 肝脏HE和油红O染色结果显示在高脂饮食组中LSS基因敲低小鼠的肝脏脂肪沉积低于野生型小鼠，LSS基因杂合敲除小鼠肠道组织中的总胆固醇含量降低(P<0.01)，但肠组织HE染色未观察到两组小鼠之间存在形态差异，LSS基因杂合敲除小鼠的胃肠动力功能也未出现显著变化，Evans blue检测肠道通透性结果显示LSS基因杂合敲除在高脂饮食小鼠的肠道通透性降低(P<0.05),Claudin-5蛋白在LSS基因杂合敲除高脂饮食小鼠的肠道组织中表达量升高(P<0.05)，而LSS蛋白在LSS杂合敲除小鼠肠道组织中表达量降低(P<0.05)。结论 在高脂饮食诱导的NAFLD模型中，LSS基因杂合敲除后通过调节肠道组织内胆固醇的代谢和上调Claudin-5的表达，减轻了高脂饮食诱导的肝脏脂肪沉积并改善了肠道的屏障功能。
关键词：羊毛固醇合成酶;;胆固醇代谢;;非酒精性脂肪肝病;;肠道通透性;;紧密连接蛋白;;肠道屏障功能
基金资助：安徽省高校科研项目(编号：2022AH050651);; 安徽医科大学校科研基金项目(编号：2022xkj107);; 蚌埠医学院科技项目自然科学重点项目(编号：2022byzd196)~~
