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作者：张正则;刘浩;何悦雯;李若根;刘慧慧;王勇;马武华;
单位：广州中医药大学第一临床医学院;广州中医药大学岭南医学研究中心;广州中医药大学第一附属医院麻醉科;广州中医药大学第一附属医院中医证候全国重点实验室;
摘要：目的：观察电针对屋尘螨（HDM）诱导的哮喘小鼠Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白因子1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路、肺部炎性反应及铁死亡的影响，探讨电针治疗哮喘的潜在机制。方法：将C57BL/6雌性小鼠随机分为空白组、模型组、电针组、地塞米松组，6只/组。采用HDM制备哮喘小鼠模型。选取“大椎”“肺俞”“足三里”进行电针干预，隔天1次，每次30 min，共5次。地塞米松组于同一时间给予地塞米松腹腔注射，1 mg/kg，共5次。评估小鼠一般情况及哮喘行为学评分，测定小鼠第0.1秒用力呼气容积（FEV_(0.1)）、用力肺活量（FVC）、呼气峰流速（PEF）等肺功能指标，计算FEV_(0.1)/FVC的百分比；以HE、PAS、Masson染色法评估小鼠肺部形态学变化，并评估炎性反应评分及气道壁厚度[气道壁总面积（Wat）/基底膜周长（Pbm）];ELISA法检测小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、肿瘤坏死因子（TNF）-α及肺泡灌洗液中白细胞介素（IL）-1β、IL-6的含量，以及血清中铁死亡相关指标丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、铁的含量；BCA法检测肺组织中MDA、GSH、铁含量；Western blot法、PCR法检测小鼠肺组织Keap1、Nrf2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体1(TFR1)的蛋白及mRNA表达水平；免疫组织化学法检测小鼠肺组织SLC7A11、GPX4、ACSL4、TFR1的阳性表达。结果：与空白组相比，模型组小鼠哮喘行为学评分升高（P<0.01）;FEV_(0.1)、FEV_(0.1)/FVC、PEF均降低（P<0.01）；支气管壁炎性细胞浸润明显加重，胶原纤维沉积，杯状细胞增殖；炎性反应评分、Wat/Pbm值升高（P<0.01）；血清、肺泡灌洗液中炎性因子TNF-α、IgE、IL-1β、IL-6含量及血清、肺组织中MDA、铁含量升高（P<0.01），血清、肺组织中GSH含量降低（P<0.01）；肺组织中Keap1、ACSL4、TFR1mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.01）,Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达水平下降（P<0.01）;ACSL4、TFR1阳性表达增加（P<0.01）,SLC7A11、GPX4阳性表达减少（P<0.01）。与模型组相比，电针组及地塞米松组小鼠上述指标均逆转（P<0.01,P<0.05）。与地塞米松组相比，电针组小鼠PEF升高（P<0.05）,IgE含量降低（P<0.05）,IL-6含量升高（P<0.05），血清及肺组织MDA、GSH含量升高（P<0.05,P<0.01），铁含量降低（P<0.01,P<0.05）,Keap1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）,Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白水平，以及ACSL4 mRNA表达水平均下降（P<0.01,P<0.05）,SLC7A11、GPX4阳性表达减少（P<0.05）。结论：电针可以缓解HDM诱导的哮喘小鼠肺部炎性反应，其机制可能与调控Keap1/Nrf2通路介导的铁死亡有关。
关键词：哮喘;;电针;;铁死亡;;Keap1/Nrf2通路
基金资助：国家自然科学基金项目(No.82074357、82305196);; 国家中医药传承创新中心科研专项重点项目(No.2023ZD03);; 广州中医药大学“双一流”与高水平大学建设学科后备人才培育项目(No.A1-2601-22-415-022);; 广州市科技计划项目基础与应用基础研究项目(No.202201010812)
