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作者：郝健亨;段杨静;常博雅;任佳;郝日雯;王海军;冀来喜;
单位：成都中医药大学针灸推拿学院;山西中医药大学第二临床学院;山西省针灸医院针灸三科;
摘要：目的：观察“秩边透水道”针法对卵巢低反应（POR）小鼠生殖功能的影响，探析针刺改善POR小鼠体外受精-胚胎移植（IVF-ET）后早期胚胎的分子机制。方法：从70只雌性C57BL/6小鼠中筛选出60只动情周期规律的小鼠，其中30只随机分为空白组、模型组和针刺组，每组10只。模型组和针刺组小鼠给予雷公藤多苷混悬液（50 mg·kg-1·d-1）灌胃2周制备POR模型，空白组给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃。造模成功后，针刺组给予“秩边透水道”针法干预，每日1次，每次20 min，连续2周。干预结束后，各组小鼠同时进行促排卵操作，并眼眶取血、摘取卵巢、获取新鲜裸卵。将经过孵育的裸卵和从15只雄性C57BL/6小鼠获取的精子，通过IVF-ET的方式分别移植到另外30只C57BL/6供体假孕雌鼠输卵管内，移植第7日获取着床胚胎组织。造模后和干预后，观察各组小鼠一般情况，比较各组小鼠动情周期紊乱率；干预后，观察各组小鼠获卵数、卵巢湿重与卵巢指数，ELISA法检测各组小鼠血清抗缪勒管激素（AMH）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）含量，HE法和透射电镜观察各组小鼠卵巢形态和线粒体超微结构，采用转录组测序技术筛选各组小鼠早期胚胎的差异表达基因（DEG）并进行生物信息学分析，实时荧光定量PCR法对差异显著的回调DEGs进行验证。结果：干预后，与空白组比较，模型组小鼠精神较差，进食量和饮水量减少，活动减少；动情周期紊乱率升高（P<0.01）；获卵数、卵巢湿重和卵巢指数降低（P<0.01）；血清AMH和E2含量降低（P<0.01），血清FSH和LH含量升高（P<0.01）；卵巢组织内闭锁卵泡增多，颗粒细胞排列层次紊乱，线粒体数量减少、出现空泡和内嵴断裂现象。与模型组比较，针刺组小鼠精神改善，进食和活动增加；动情周期紊乱率降低（P<0.01）；获卵数、卵巢湿重和卵巢指数升高（P<0.01,P<0.05）；血清AMH和E2含量升高（P<0.01），血清FSH和LH含量降低（P<0.01）；卵巢组织内闭锁卵泡减少，各级卵泡数量增加，线粒体数量增加、空泡和内嵴断裂现象减少。在空白组vs模型组和模型组vs针刺组之间共筛选到258个交集DEGs,194个交集DEGs在干预前后出现回调趋势，其中地塞米松诱导的Ras相关蛋白1(Rasd1)、乳腺癌中雌激素调控基因1(Greb1)、含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体6(Lgr6)、弗雷泽综合征1(Fras1)、载脂蛋白D(Apod)是差异表达最显著的5个回调DEGs。与空白组比较，模型组小鼠胚胎Rasd1、Greb1、Lgr6、Fras1和Apod mRNA表达水平降低（P<0.01,P<0.05）；与模型组比较，针刺组小鼠胚胎Rasd1、Greb1、Lgr6、Fras1和Apod mRNA表达水平升高（P<0.05,P<0.01），与DEGs筛选结果一致。基因本体（GO）分析显示共表达回调基因主要参与肌母细胞分化、心内膜垫发育、心脏形态发生等生物过程；京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示共表达回调基因主要富集于Wnt信号通路上，同时与多种类型的心肌疾病有关。结论：“秩边透水道”针法可以改善POR小鼠卵巢低反应，促进卵泡正常发育和排出，进而提高早期胚胎的质量，降低胚胎心脏等器官发育缺陷和畸形的风险，其潜在机制可能与通过Wnt信号通路调控胚胎关键基因的表达模式有关。
关键词：卵巢低反应;;针刺;;秩边透水道;;转录组学;;体外受精-胚胎移植;;差异表达基因
基金资助：国家自然科学基金资助项目：82074549;; 山西省中医药管理局基金项目：2023ZYYB048;; 山西省教育厅基金项目：2023L187
