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作者：常博雅;任佳;金旭;郝健亨;高珍;曹玉霞;王海军;
单位：山西中医药大学第二临床学院;山西中医药大学附属针灸推拿医院针灸三科;
摘要：目的：通过观察“秩边透水道”针法对卵巢低反应（POR）小鼠肠道菌群的影响，探讨其改善POR小鼠卵巢功能的可能机制。方法：35只SPF级C57BL/6雌性小鼠，阴道涂片法筛选出动情周期正常的30只小鼠，随机选取10只作为空白组，剩余小鼠作为造模组，采用雷公藤多苷混悬液灌胃制备POR小鼠模型，将造模成功的小鼠随机分为模型组和针刺组，每组10只。造模后，针刺组予“秩边透水道”针法干预，每日1次，每次20 min。干预结束当日开始促排卵，各组促排卵后完成取材。采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠动情周期变化，记录各组小鼠获卵数、卵巢湿重和卵巢指数；ELISA法检测小鼠血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、抗缪勒管激素（AMH）含量；HE染色法观察小鼠卵巢组织形态；16S rRNA基因测序技术检测小鼠肠道菌群；Western blot法检测小鼠结肠组织封闭蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白（ZO-1）蛋白表达。小鼠血清激素指标、获卵数、卵巢指数与肠道微生物进行相关性分析。结果：与空白组比较，模型组小鼠动情周期紊乱率升高（P<0.01），血清FSH、LH含量及LH/FSH升高（P<0.01），获卵数、卵巢湿重、卵巢指数及血清E2、AMH含量降低（P<0.01）；与模型组比较，针刺组小鼠动情周期紊乱率降低（P<0.01），血清FSH、LH含量及LH/FSH降低（P<0.01），获卵数、卵巢湿重、卵巢指数及血清AMH、E2含量升高（P<0.01,P<0.05）。空白组小鼠卵巢组织中有大量发育良好的原始卵泡，各级卵泡数量丰富，排列紧密；模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡大量增多，各级卵泡数量减少，排列松散，较空白组正常卵泡数量减少（P<0.01），闭锁卵泡数量增加（P<0.01）；针刺组小鼠卵巢组织闭锁卵泡减少，各级卵泡数量增多，较模型组正常卵泡数量增加（P<0.01），闭锁卵泡数量减少（P<0.01）。与空白组比较，模型组小鼠肠道菌群物种丰富度较低，Chao1、Shannon指数降低（P<0.01）；与空白组聚类距离较远；厚壁菌门＿D、疣微菌门、副鼠杆菌属、杜氏乳杆菌属和穆里巴库鲁姆菌属相对丰度升高（P<0.01,P<0.05），厚壁菌门＿A相对丰度及结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达降低（P<0.01）。与模型组比较，针刺组肠道菌群物种丰富度有所改善，Chao1、Shannon指数升高（P<0.05）；与空白组聚类距离较近；厚壁菌门＿D、疣微菌门和穆里巴库鲁姆菌属相对丰度降低（P<0.05,P<0.01），厚壁菌门＿A相对丰度及结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）。肠道微生物与小鼠血清激素指标、卵巢指数之间存在相关性。京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示交集物种的代谢通路与氨基酸生物合成、核苷与核苷酸生物合成等相关。结论：“秩边透水道”针法可以改善POR小鼠的卵巢功能，其机制可能与调控肠道菌群结构和维持肠道屏障稳态有关。
关键词：卵巢低反应;;秩边透水道;;针刺;;肠道菌群;;肠道屏障
基金资助：国家自然基金面上项目：82074549;; 山西省自然科学研究面上项目：202303021221156;; 山西中医药大学博士科研启动基金项目：2023BK17;; 山西省教育厅项目：2023L187
