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作者：霍银波;杨佳琪;杨扬仲夫;陶晴;梁文;许丽;李兰英;左小磊;颜娟;丁敏;马爱文;刘刚;
单位：上海市计量测试技术研究院,国家市场监督管理总局生物分析计量溯源重点实验室;上海海洋大学食品学院;中国计量测试学会;上海交通大学医学院分子医学研究院,上海市核酸化学与纳米医学重点实验室;
摘要：慢病毒载体（Lentiviral vectors, LVs）是将目的基因整合到宿主基因组的关键基因递送工具，但可能带来插入性诱变风险。单位细胞中载体基因拷贝数（Vector copy number, VCN）是判定基因修饰安全性的关键指标，但其定量分析过程的可靠性和准确度易受多种因素干扰。研发特定拷贝数载体基因的细胞标准物质，实现定量分析过程的质量控制和量值溯源，是提升分析结果可靠性和一致性的可行方案。然而，包含特定拷贝数载体基因的细胞标准物质的研发面临挑战，主要体现在细胞样品设计制备和高等级定值技术等方面。本研究基于T淋巴细胞系开发出LVs基因拷贝数分别为1和2 copy/cell的细胞标准物质VCN-1和VCN-2，并建立高准确度的双重数字聚合酶链式反应（Digital polymerase chain reaction, dPCR）方法，实现对LVs基因和内源基因同时定量分析。通过二代测序结果和流式细胞术检测结果对dPCR结果进行交叉验证。共聚焦显微表征结果显示，本标准物质细胞形态完整，VCN-1和VCN-2的定值结果分别为（1.07±0.11） copy/cell和（2.09±0.21） copy/cell，其稳定性和均匀性考察结果均符合标准物质研制要求。此细胞标准物质可为慢病毒VCN检测提供全过程质控和溯源支持，保障拷贝数检测量值的准确性、可比性和有效性
关键词：慢病毒载体;;载体基因拷贝数;;细胞标准物质;;数字聚合酶链式反应
基金资助：上海市市场监督管理局科技项目(No.2025KJ20);; 国家市场监督管理总局技术保障专项项目(No.2023YJ01);; 中国博士后科学基金面上项目(No.2023M732327);; 上海市科委长三角科技创新共同体领域项目(No.23002400202);; 国家自然科学基金面上基金(No.22074093)资助~~
