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作者：胡欣言;张倬毓;张鹏飞;
单位：同济大学医学院附属皮肤病医院中心实验室;中国人民解放军海军军医大学;
摘要：病原体的快速精准检测是公共卫生防控的关键环节之一。传统的核酸检测技术如实时荧光定量聚合酶链式反应和等温扩增等的灵敏度较高，但存在操作复杂和气溶胶污染等问题，难以满足病原体现场快速检测的需求。近年来，基于规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白（CRISPR/Cas）系统的无扩增核酸检测技术因具有高特异性、快速响应和检测过程简便等优势，已成为病原体核酸检测技术发展的新方向。本文总结了近三年CRISPR/Cas系统在无扩增病原体核酸检测领域的研究进展，对5种的常见CRISPR/Cas系统（Cas9、Cas12a、Cas12b、Cas13a和Cas12f）及其用于核酸检测的原理进行了介绍，系统梳理并分类阐述了基于不同原理的CRISPR无扩增核酸传感策略，主要包括超灵敏信号（包括电化学、电化学发光和新型光学信号）和各类信号放大策略（包括CRISPR RNA(crRNA)/酶级联和微纳限域）。针对CRISPR/Cas系统面临的样本预处理繁琐、操作流程复杂、难以实现多重检测及原型间隔序列邻近基序（PAM）依赖等挑战，探讨了潜在的解决方案与未来的发展方向，总结了CRISPR/Cas无扩增检测技术在病原体诊断中的优势与产业化前景，重点探讨了传感器稳定性、试剂标准化和临床转化等问题，以期为基于CRISPR/Cas系统的无扩增核酸检测技术向高灵敏、可多重检测和具有现场即时检测能力的新一代诊断平台发展提供参考。
关键词：规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白;;病原体;;分子诊断;;核酸检测;;生物传感器;;评述
基金资助：同济大学医学+X交叉研究项目(No.2025-0650-YB-12);; 上海市科委科技项目(No.22S31902000)资助~~
