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作者：唐芬;付丽娜;黄雅涓;马飞;方梦雪;张良晓;喻理;
单位：中国农业科学院油料作物研究所,农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心,农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室(武汉),农业农村部生物毒素检测重点实验室,国家农业检测基准实验室(生物毒素);湖北洪山实验室;
摘要：伏马菌素B_1(FB_1)极易污染玉米和小麦等农产品，因此，开发灵敏、低成本、快速和高通量的FB_1筛查方法，对于保障农产品和食品安全至关重要。本研究合成了一种具有类过氧化物酶活性的Zn/Fe金属有机框架（Zn/Fe MOF）衍生碳纳米材料。将FB_1单克隆抗体与Zn/Fe MOF衍生碳纳米材料通过物理吸附偶联，构建了具有类过氧化物酶活性的免疫探针。将FB_1-牛血清白蛋白（BSA）偶联物包被在96孔板上，当加入待测样品和免疫探针时，包被抗原和样本中的FB_1与免疫探针中的抗体发生竞争免疫反应，生成抗原抗体复合物。结合在96孔板上的免疫探针的量与样本中目标物的量成反比。在过氧化氢存在的条件下，以3,3′,5,5′-四甲基联苯胺（TMB）为底物，结合在孔板底部包被抗原上的具有类过氧化物酶活性的免疫探针可以催化TMB生成蓝色的氧化产物（oxTMB），因此，可以通过颜色信号变化对FB_1进行定量检测。优化了包被抗原浓度、免疫探针、孵育时间、提取液中甲醇浓度和缓冲液的pH值等实验参数，建立了用于粮食中FB_1检测的直接竞争纳米酶联免疫吸附法，对FB_1的检出限为0.073 ng/mL，检测范围为0.073～7.32 ng/mL。本方法具有良好的准确性和精密度，加标回收率为86.2%～109.6%，变异系数低于10%。对实际玉米和小麦样品中FB_1的检测结果与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法的结果一致（相关系数为0.98～0.99）。本方法不仅提高了检测FB_1的灵敏度和效率，也扩大了MOF衍生碳纳米材料的应用范围。
关键词：伏马菌素B_1;;金属有机框架;;类过氧化物酶活性;;纳米酶;;酶联免疫吸附法;;粮食
基金资助：国家自然科学基金项目(No.32172328);; 中央非营利性科研机构基本科研业务费项目(No.1610172022004);; 湖北省青年拔尖人才培养计划项目;; 湖北省创新项目(No.2024-620-000-001-031)资助~~
