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中药材2025年第07期:一点红实时荧光定量PCR内参基因的筛选及验证

来源:期刊VIP网 时间:


作者:蒋雪梅;覃艳青;姚金丽;王柳萍;梁臣艳;蔡文慧;涂冬萍;

单位:广西中医药大学药学院;广西柳药集团股份有限公司;中南大学化学化工学院;

摘要:目的:筛选出适用于一点红Emilia sonchifolia(L.)DC.基因定量研究所需的内参基因。方法:分别以一点红根、茎、叶、花4个不同组织和全草为实验材料,采用实时荧光定量PCR技术对从一点红转录组数据中筛选到的4个候选内参基因(Tubulin、Ubiquitin、GAPDH、UPL)进行分析,同时结合geNorm、 NormFinder、BestKeeper、RefFinder4种统计学方法评估候选内参基因的稳定性,筛选出在一点红中稳定表达的内参基因。结果:4个候选内参基因稳定性综合评价的排名从大至小分别为UPL、Tubulin、GAPDH、Ubiquiti,最终确定UPL基因在4个候选内参基因中的表达稳定性最佳。qRT-PCR验证的结果发现,UPL基因表达的稳定性符合预期。结论:UPL基因在一点红根、茎、叶、花和全草组织中的表达最稳定,适合作为内参基因,该结果为后续一点红相关基因表达分析研究积累了必要的实验基础。

关键词:一点红;;内参基因;;实时荧光定量PCR

基金资助:广西自然科学基金面上项目(2023GXNSFAA026331);; 广西壮族自治区教育厅高校黄大年式教学团队“中药学传承创新教师团队”项目(桂教教师[2023]31号);; 广西中医药大学校级科研重点项目(2021ZD003);广西中医药大学“桂派杏林青年英才”项目(2022C033);广西中医药大学桂派中医药传承创新团队项目(2022B005)