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作者：赵宇;薛云;黄家俊;吴迪友;杨顺;杨彬;黄俊卿;
单位：河南中医药大学骨伤学院;河南省中医院疼痛科;
摘要：目的：探讨桂枝芍药知母汤含药血清对大鼠椎间盘髓核细胞退变的影响及其作用机制。方法：20只雄性SD大鼠分别灌胃生理盐水、桂枝芍药知母汤(12.6 g/kg),连续给药7 d后收集血清。另取10只雄性大鼠，分离髓核细胞。(1)采用IL-1β处理来构建髓核细胞退变模型，分别加入不同浓度桂枝芍药知母汤含药血清和铁死亡抑制剂去铁胺(DFO),探究桂枝芍药知母汤含药血清对退变髓核细胞存活率的影响。(2)加入DFO,研究铁死亡在IL-1β诱导髓核细胞退变中的作用。(3)采用IL-1β和20%桂枝芍药知母汤含药血清处理，研究桂枝芍药知母汤含药血清对IL-1β处理髓核细胞PI3K/AKT/FoxO_(3a)信号通路的影响。(4)在IL-1β和20%桂枝芍药知母汤含药血清处理的同时，加入PI3K/AKT激活剂740Y-P进行干预，研究PI3K/AKT/FoxO_(3a)通路在桂枝芍药知母汤含药血清调控髓核细胞铁死亡中的作用。CCK-8法检测细胞存活率，比色法检测细胞Fe~(2+)、MDA、GSH水平；细胞与胶原的黏附实验检测CollagenⅡ与大鼠髓核细胞结合能力；免疫荧光检测p-PI3K、p-AKT、p-FoxO_(3a)蛋白表达；Western Blot检测p-PI3K、p-AKT、p-FoxO_(3a)、SLC7A11、GPX4、MMP-13、CollagenⅡ蛋白表达。结果：与模型组比较，桂枝芍药知母汤含药血清组和DFO组细胞存活率和CollagenⅡ结合能力显著升高，Fe~(2+)、MDA水平和p-PI3K、p-AKT、p-FoxO_(3a)、MMP-13蛋白表达显著降低，SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ蛋白表达显著升高，桂枝芍药知母汤含药血清组FoxO_(3a)蛋白表达显著升高(P<0.05)。740Y-P能逆转桂枝芍药知母汤含药血清的作用(P<0.05)。结论：桂枝芍药知母汤含药血清能激活PI3K/AKT/FoxO_(3a)信号通路，抑制IL-1β诱导的大鼠髓核细胞铁死亡，延缓椎间盘髓核细胞的退变。
关键词：桂枝芍药知母汤;;椎间盘;;髓核细胞退变;;铁死亡;;PI3K/AKT/FoxO_(3a)
基金资助：2024年河南省中医药课题研究专项课题(2024ZY2066);; 河南省中医药文化与管理研究项目(TCM2024027)
