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作者：谢伊代·如则;胡宇童;赖厚福;云思敏;冯光辰;徐又佳;
单位：苏州大学附属第二医院骨质疏松中心;苏州大学附属第二医院骨科;
摘要：目的 探讨Midkine (MDK)蛋白在破骨细胞分化中的作用及其抑制剂iMDK对骨质流失的改善效果。方法 采用CCK-8法检测重组MDK蛋白对细胞活力的影响。通过RANKL诱导小鼠骨髓单核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMCs）体外分化为破骨细胞，分别用不同浓度的重组MDK蛋白处理，使用TRAP染色法测定成熟破骨细胞数量，罗丹明-鬼笔环肽染色法检测丝状肌动蛋白环（filamentous actin,F-actin）形成，蛋白免疫印迹法分析破骨细胞分化标志蛋白、 NF-κB信号通路相关蛋白p65的磷酸化水平和核因子κ-B抑制蛋白α (inhibitor of nuclear factor kappa-B alpha, IκBα)的表达。建立小鼠卵巢去势骨质疏松模型，随机分为假手术组、模型组、模型+iMDK组，进行8周干预。通过酶联免疫吸附测定检测血清MDK水平，显微CT观察股骨远端骨密度和骨微结构，并进行TRAP染色分析骨组织破骨细胞数量。结果 体外实验显示，MDK蛋白不影响BMMCs活性，并显著增加TRAP阳性破骨细胞和F-actin的形成，并上调破骨细胞分化和骨吸收相关蛋白表达，同时增强NF-κB信号通路中p65的磷酸化并降低IκBα的表达。NF-κB抑制剂BAY11-7082部分逆转重组MDK蛋白对破骨细胞分化标志蛋白的上调作用。体内实验表明，模型组小鼠血清MDK蛋白水平显著高于假手术组。模型+iMDK组小鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量显著高于模型组，且骨组织中TRAP表达显著低于模型组。结论 MDK蛋白促进体外破骨细胞分化，可能通过激活NF-κB信号通路上调破骨细胞分化标志蛋白的表达。MDK抑制剂iMDK在改善雌激素缺乏导致的骨质流失方面显示出潜力，为绝经后骨质疏松症的治疗提供可行方案。
关键词：Midkine;;破骨细胞;;骨质疏松;;核因子活化B细胞κ轻链增强子
基金资助：国家自然科学基金（82372455）;; 江苏省医学重点实验室建设单位（JSDW202254）;; 中核医疗“核医科技创新”计划资助项目（ZHYLZD2023001）
