来源：期刊VIP网 时间：
作者：康浩然;黄雨薇;宋程;高鹏;张永宁;周磊;盖新娜;韩军;郭鑫;杨汉春;
单位：中国农业大学动物医学院兽医公共卫生安全全国重点实验室;中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室;兆丰华生物科技(南京)有限公司北京生物医药科技中心;
摘要：猪肺炎支原体（Mhp）是引起猪支原体肺炎（MPS）的病原，给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要，目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测（POCT）的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基因p46，通过序列比对和系统性的引物筛选设计了exo探针及其对应的重组酶介导的等温扩增（RAA）技术引物对，建立了Mhp实时荧光（real-time）RAA快速检测方法；随后，对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测，并使用该方法和实时荧光定量PCR(qPCR)对比检测临床样本。结果显示，该方法与猪链球菌、肺炎克雷伯氏菌、猪格拉瑟氏菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌均无交叉反应，特异性好；Mhp real-time RAA及其可视化方法的检测敏感性分别为18和29 copies/μL(95%置信区间)，敏感性强；组内和组间重复性试验变异系数均小于8.0%，重复性好；对108份猪临床样本的检测结果显示，该方法及其可视化方法与Mhp qPCR方法的符合率分别为98.15%和99.07%。本试验所建立Mhp real-time RAA方法可以通过便捷式蓝光仪器实现结果的可视化，更适用于资源匮乏的诊断实验室和基层现场，为MPS的防控提供了技术手段。
关键词：重组酶介导的等温扩增技术;;猪肺炎支原体;;实时荧光定量PCR;;快速检测
基金资助：教育部产学合作协同育人项目（220904860093831）
