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作者：屈玮钰;李鑫;
单位：中国农业大学动物医学院;
摘要：伪狂犬病病毒（PRV）是α疱疹病毒家族成员，其独特短区1(US1)基因在病毒生命周期中发挥关键作用，但US1在PRV中的功能研究尚不充分。本试验旨在构建PRV US1基因缺失株（PRV-ΔUS1），并探究其生物学特性。首先，通过蛋白表达纯化和动物免疫方法制备鼠源PRV US1多克隆抗体，并利用成簇规律间隔短回文重复序列及其关联蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建PRV-ΔUS1，通过聚合酶链式反应（PCR）和蛋白质印迹法（WB）进行验证；然后，采用蚀斑试验、病毒生长曲线测定和连续传代遗传稳定性试验分析PRV-ΔUS1的生物学特性。结果显示，成功制备鼠源PRV US1多克隆抗体；经PCR和WB验证，PRV-ΔUS1成功缺失US1基因；与野生型毒株相比，PRV-ΔUS1的蚀斑直径极其显著缩小（P<0.001）,6、12、24和48 h各个时间段的体外增殖能力均极其显著减弱（P<0.001），且在多次传代中保持遗传稳定性。结果表明，本试验成功构建PRV-ΔUS1，并证实US1基因可影响PRV的蚀斑形成和增殖能力，为PRV US1基因的功能研究和新型疫苗研发提供了重要工具和理论基础。
关键词：伪狂犬病病毒(PRV);;US1基因;;CRISPR/Cas9;;基因缺失病毒
基金资助：国家自然科学基金面上项目(32373020)
