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作者：李钰婷;王衡平;李芳;周昕;王会岩;
单位：扬州大学兽医学院;吉林医药学院吉林省抗体工程科技协同创新中心;
摘要：为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳（N）蛋白的单克隆抗体。本试验构建和鉴定重组表达质粒pET28a(+)-sumo-N，以原核表达并纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠，应用单B细胞筛选技术获得分泌针对N蛋白的特异性抗体的单B细胞，再经单细胞测序获得抗体基因序列并构建真核表达质粒，利用中华仓鼠卵巢（CHO）细胞瞬时转染表达并筛选和纯化单克隆抗体，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定其效价，蛋白质免疫印迹（WB）鉴定其特异性，生物膜干涉（BLI）技术测定其亲和力和表位分组。结果显示，N蛋白呈可溶性表达，分子量约34 kDa。基于单B细胞筛选技术筛选出5株单克隆抗体。5株单克隆抗体效价均大于10~5，均可与PRRSV N蛋白产生特异性反应，亲和力解离常数（Kd）分别为8.72×10~(-9)、1.41×10~(-8)、1.14×10~(-10)、1.00×10~(-12)和1.54×10~(-11) mol/L，且表位均不相同。本试验应用单B细胞筛选技术成功制备出抗PRRSV N蛋白的特异性单克隆抗体，为进一步研究PRRSV N蛋白的结构特性、功能作用以及建立高效且快速的PRRSV抗体检测方法提供参考。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV);;N蛋白;;单克隆抗体;;单B细胞筛选技术
基金资助：吉林省科技发展计划项目（20240404022ZP）
