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作者：陈登金;李鹏宇;董楠;常昊天;胡渤;肖进;张蕾;马良;
单位：中牧实业股份有限公司农业部兽用生物制品与化药重点实验室北京市兽用多肽疫苗设计与制备工程技术中心;
摘要：为实现对猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PoRV）和猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）的同时鉴别检测，本试验根据PEDV核衣壳蛋白（N）基因、PoRV结构蛋白6(VP6)基因和PDCoV基质蛋白（M）基因筛选设计3对特异性引物和荧光标记探针，通过矩阵法优化反应条件，建立多重荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法，绘制标准曲线，验证该方法的特异性、敏感性和重复性，并进行临床样本检测。标准曲线拟合试验结果显示，PEDV、PoRV和PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法针对各病毒扩增均具有良好的相关系数和扩增效率；特异性试验结果显示，该方法仅对PEDV、PoRV和PDCoV呈现特异性扩增，不与其他猪源病毒发生交叉反应；敏感性试验结果显示，该方法对PEDV、PoRV和PDCoV的最低检测限均为1×10~0 copies/μL；组内和组间重复性试验的Ct值变异系数均小于2%，具有良好的重复性。对367份临床样本进行PEDV、PoRV和PDCoV检测，多重荧光定量RT-PCR检测的阳性率为92.37%(339/367)，而地方标准多重RT-PCR检测的阳性率为83.38%(306/367),2种方法临床样本检测符合率为91.01%(334/367)。结果表明，本试验建立了一种可快速、准确、灵敏检测PEDV、PoRV和PDCoV的多重荧光定量RT-PCR方法，可用于实验室病原和临床样本检测，为临床猪病毒性腹泻的研究和防控提供了有效技术方法。
关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);;猪轮状病毒(PoRV);;猪德尔塔冠状病毒(PDCoV);;逆转录聚合酶链式反应
