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作者：黄禹丰;吴睿智;徐璐;邹兴启;车斯琪;李芳韬;夏应菊;赵俊杰;赵启祖;刘业兵;贾伟新;朱元源;
单位：华南农业大学兽医学院;中国兽医药品监察所国家/WOAH猪瘟参考实验室;
摘要：研制猪瘟病毒（CSFV）E~(rns)结构蛋白单克隆抗体（简称“单抗”），对研究E~(rns)抗原结构和建立CSFV诊断方法具有重要意义。本试验利用单个B细胞抗体技术制备系列单抗，用CSFV E~(rns)蛋白免疫BALB/c小鼠，通过流式分选技术分选特异性结合E~(rns)蛋白的单个B细胞，利用巢式聚合酶链式反应（PCR）扩增IgG抗体重链和轻链可变区基因，分别构建IgG抗体重链和轻链完整基因重组质粒，然后将重链和轻链重组质粒共转染至人胚胎肾细胞（HEK-293T）中进行单抗表达、纯化，并对单抗进行蛋白免疫印记（WB）、间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光（IFA）鉴定。流式分选结果显示，本试验分选得到48个特异性结合E~(rns)蛋白的单个B细胞。PCR扩增结果显示，从48个B细胞中扩增得到16对配对的IgG抗体重链和轻链可变区基因。WB、间接ELISA和IFA结果显示，本试验成功制备得到13株能与CSFV发生反应的E~(rns)单抗，其中1株（E0M11）仅与CSFV疫苗毒株（HCLV株、Thiverval株）反应，不与CSFV流行毒株（IVDC-HeB-01、IVDC-HuB-06）和牛流行性腹泻病毒（BVDV）反应。结果表明，本试验建立了快速筛选CSFV单抗的技术平台，制备的单抗有望用于CSFV鉴别诊断方法的建立，具有一定的临床应用价值。
关键词：猪瘟病毒(CSFV);;单克隆抗体;;单个B细胞抗体技术;;E~(rns)蛋白
基金资助：国家重点研发计划项目（2023YFD1800504）
