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作者：李云蕾;叶凯文;贾斌;张永生;
单位：石河子大学动物科技学院;
摘要：本研究旨在通过克隆梅花鹿Zfx基因并解析其分子特征，为设计梅花鹿Zfx干扰载体提供关键的序列靶点和理论依据。本试验采集梅花鹿睾丸组织，提取总RNA并反转录为cDNA，设计2对引物分段扩增Zfx基因CDS区，通过克隆测序获得全长序列，利用生物信息学工具分析其理化性质、亲疏水性、糖基化/磷酸化位点及二、三级结构，构建系统进化树、开展同源性分析并利用RT-qPCR检测其组织表达规律。结果显示，本研究成功克隆获得了梅花鹿Zfx基因CDS区，全长1 479 bp。Zfx基因编码492个氨基酸。Zfx蛋白分子式为C_(2 322)H_(3 675)N_(635)O_(791)S_(28)，相对分子量54 041.18，理论等电点4.5，不稳定系数46.84，属不稳定亲水蛋白；含36个磷酸化位点（19个Ser、5个Tyr、12个Thr）和3个糖基化位点。二级结构以无规卷曲（68.70%）为主，三级结构预测与二级结构一致。系统进化树分析显示，梅花鹿与马鹿（鹿科）亲缘关系最近；与同属偶蹄目反刍亚目牛科的家牛、野牦牛、山羊、绵羊亲缘关系次之；与虎、家猫、家犬等非反刍动物亲缘关系较远。重叠区域的同源性分析表明，梅花鹿与马鹿、白尾鹿、虎、家牛等9个物种的Zfx基因序列同源性达97.05%，其中与马鹿的同源性最高。GO功能富集分析显示Zfx基因参与了性别决定等生物过程，而KEGG通路富集分析表明其参与了癌症相关通路。组织表达分析表明，梅花鹿Zfx基因在睾丸和肝脏中高表达，且均极显著高于肌肉组织（P<0.01）。综上，梅花鹿Zfx基因在物种进化中表现高度保守，蛋白结构特征提示其可能通过磷酸化修饰参与泛素-蛋白酶体降解途径，调控精子发生。
关键词：梅花鹿;;Zfx基因;;基因克隆;;组织表达
基金资助：第七师胡杨河市石河子大学创新合作专项（QS2025008）;; 兵团科技特派员创新创业项目（KC2024CC007）;; 第二师铁门关市重点领域科技攻关计划项目（KH0069）
