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作者：阿迪莱·艾力;雷艳;赵树林;付强;薛慧婷;向志宇;赵红琼;
单位：喀什地区第一人民医院;新疆农业大学动物医学学院;
摘要：本研究旨在利用原核表达系统，制备重组羊生长激素（Ovine growth hormone,oGH）蛋白，利用该蛋白制备抗血清，用于oGH相关检测。利用PCR方法扩增oGH基因，构建重组质粒p Cold-MBP-oGH，将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)，加入IPTG诱导，探讨不同IPTG诱导条件对融合蛋白表达量的影响，利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化融合蛋白，Western blot技术鉴定融合蛋白；将纯化后的MBP-oGH融合蛋白作为抗原与弗氏佐剂混合，免疫2只新西兰兔，经5次免疫后获得抗血清。结果显示，本试验成功构建了重组质粒p ColdMBP-oGH，成功表达了MBP-oGH融合蛋白，摸索出MBP-oGH高表达的最适条件为：1.2 mM IPTG,37℃，5 h。SDS-PAGE鉴定镍柱纯化产物为单一电泳条带的目的蛋白。Western blot结果显示，p Cold-MBP-oGH融合蛋白能与GH的抗体发生特异性结合，2只家兔的抗血清对MBP-oGH融合蛋白具有免疫特异性，且显示单一条带。本试验利用原核表达系统成功表达纯化了MBP-oGH融合蛋白，获得的抗血清对该融合蛋白具有免疫特异性。
关键词：羊;;生长激素;;原核表达;;蛋白纯化;;抗血清
基金资助：国家自然科学基金（32060784）
