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作者：宋连杰;武震钢;王一凡;侯立夫;李树桐;黄丽鹏;徐鸿峰;周英昊;
单位：承德市农林科学院;承德市双桥区农业农村局;承德市农业农村局;宽城县农业农村局;
摘要：为了探究一种简单、快速且成本低廉的分离犊牛精原干细胞（Spermatogonia stem cells,SSCs）的方法，试验选用6～8月龄犊牛睾丸，机械剪碎为1 mm~3大小，使用胶原酶、胰酶、透明质酸酶及脱氧核糖核酸酶消化成单细胞悬液，根据细胞的下沉速度及细胞表面成分的不同，选用明胶、大鼠尾胶原Ⅰ、层粘连蛋白包被的培养皿进行贴壁纯化，并采用特异性标记计算各步纯化过程中阳性细胞所占的比率。将纯化的精原干细胞与支持细胞共培养，采用碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）染色鉴定干细胞、荧光定量PCR方法检测其特异性标志基因、免疫荧光染色方法进行细胞特异性蛋白鉴定。结果表明，将精原干细胞与支持细胞共培养，细胞容易增殖且形成克隆团；采用不同基质包被的培养皿差速贴壁法进行纯化，分离纯度为82%；将精原干细胞进行AP染色，细胞呈AP阳性，经特异性标志基因标记结果为差异极显著（P<0.01）；经免疫荧光染色，检测到干细胞标记蛋白基因产物9.5(Protein gene product 9.5,Pgp9.5)。综上，采用本试验的消化酶和不同基质包被的培养皿可分离培养出犊牛睾丸精原干细胞。
关键词：牛;;精原干细胞;;分离;;培养;;鉴定
基金资助：承德市科技计划项目（202305B049）;; 承德国家可持续发展议程创新示范区建设科技专项项目（202202F016）;; 中央引导地方科技发展资金项目（216Z6603G）
