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作者：韩旭东;任宇尧;刘燕;赵博昊;吴信生;陈阳;
单位：扬州大学动物与科学学院;浙江省农科院畜牧兽医研究所;
摘要：本实验旨在研究羟基类固醇17-β脱氢酶12(17β Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 12,HSD17B12)对兔卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。首先克隆了兔HSD17B12基因，进行生物信息学分析；分离原代兔颗粒细胞(Granulosa Cells,GCs)，并利用FSHR免疫荧光法进行鉴定；构建HSD17B12基因过表达质粒及干扰RNA，转染GCs，利用qRT-PCR检测HSD17B12对增殖、凋亡相关基因的调控作用，并利用流式细胞、CCK8等方法检测HSD17B12对GCs增殖、凋亡的影响。结果显示：(1)利用FSHR免疫荧光染色，鉴定分离原代细胞是GCs,FSHR表达呈阳性。(2)克隆HSD17B12基因，发现其cDNA全长为938 bp，编码312个氨基酸。进化树显示兔与黑猩猩(Pan Troglodytes)、猕猴(Macaca Mulatta)等聚在一起，鸡(Gallus Gallus)为外支。(3)过表达HSD17B12可以提高增殖相关基因AKT1-1的表达(P<0.01)，降低凋亡相关基因Bad、Fas、FasL、P53(P<0.01)以及Bcl-2(P<0.05)的表达；干扰后，对基因的调控作用相反。(4) HSD17B12可促进GCs增殖，抑制GCs凋亡(P<0.01)。因此，HSD17B12可能通过调控AKT1、Bad、Fas、FasL、P53等基因的表达，显著促进兔GCs增殖，抑制其凋亡，为其在母兔卵巢发育中的作用机制研究提供理论依据。
关键词：HSD17B12;兔;颗粒细胞;增殖;凋亡
基金资助：财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系资助（CARS-43-A-1）; 江苏现代农业产业技术体系建设专项（JA TS[2023]445）; 浙江省农业新品种选育重大科技专项（2021C02068-7）; 扬州大学青蓝工程项目
