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作者：蓝婷婷;赵兵菲;吴传梅;梁潘;杨楚楚;谭小姚;汝梅;
单位：广西中医药大学;
摘要：目的：克隆分析夏枯草中对羟基苯丙酮酸双氧化酶基因PvHPPD,并对其编码蛋白进行原核表达与纯化，为日后探索对羟基苯丙酮酸双氧化酶的生物学作用提供依据。方法：基于夏枯草转录组数据库，利用同源比对和电子克隆得到PvHPPD cDNA序列，设计引物扩增PvHPPD cDNA,并进行生物信息学分析。将PvHPPD cDNA序列连接到pMAL-c5x载体上融合麦芽糖标签，转化BL21(DE3)表达菌中，IPTG诱导蛋白表达并进行纯化。结果：PvHPPD的cDNA序列长1 850 bp, ORF序列长1 452 bp,编码483个氨基酸，编码蛋白为亲水性非跨膜蛋白。多序列比对分析表明，该基因具有HPPD蛋白特有的保守结构域，保守区域多集中在C端，N端多变化。系统进化分析表明，PvHPPD基因表达蛋白与唇形科植物聚为一组，并与虎尾紫苏的同源性达85%。体外蛋白表达发现该蛋白在上清液和沉淀(包涵体)中均有表达，沉淀中的表达更多。结论：该研究成功获得PvHPPD基因，并掌握了该基因编码蛋白的生物信息学特征及体外表达体系，该结果将有利于后续深入研究PvHPPD基因及其在迷迭香酸生物合成途径中的功能和调控机制。
关键词：夏枯草;;对羟基苯丙酮酸双氧化酶(HPPD);;基因克隆;;生物信息学分析;;原核表达
基金资助：广西科技基地和人才专项(桂科AD19245087);; 2021年大学生创新创业训练计划项目(202110600036);; 2023年大学生创新创业训练计划项目(S202310600141)
