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作者：王慧敏;蔡纪堂;吴紫陆;柴峰;
单位：河南省中医院;河南中医药大学第二临床医学院;
摘要：目的：探究白花蛇舌草总黄酮对鼻咽癌细胞CNE1周期和凋亡的影响及可能的分子作用机制。方法：(1)为研究白花蛇舌草总黄酮对CNE1细胞周期和凋亡的影响，在考察白花蛇舌草总黄酮对鼻咽癌细胞CNE1和鼻咽上皮细胞NP69细胞活力的影响后，将CNE1细胞分为对照组、白花蛇舌草总黄酮(25、50、100μg/mL)组；四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞活力；平板克隆检测白花蛇舌草总黄酮对CNE1细胞克隆形成能力的影响；JC-1荧光探针检测线粒体膜电位；Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态学变化；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；(2)为研究白花蛇舌草总黄酮抑制CNE1细胞增殖可能的分子机制，将CNE1细胞分为对照组、白花蛇舌草总黄酮(100μg/mL)组，采用Western Blot检测p-PERX、ATF4、CHOP蛋白表达，并利用转录组测序技术获取基因表达，对差异表达基因进行生物学分析；(3)为研究类PKR的内质网激酶(PERK)在白花蛇舌草总黄酮诱导CNE1细胞周期阻滞和凋亡中的作用，采用小干扰核糖核酸(siRNA)进行干预；(4)为研究活性氧(ROS)在调控PERK信号中的作用，在白花蛇舌草总黄酮处理过程中孵育N-乙酰半胱氨酸(NAC)。结果：与对照组比较，白花蛇舌草总黄酮组CNE1细胞的存活率显著降低(P<0.05),其作用呈剂量及时间依赖性。白花蛇舌草总黄酮处理引起的细胞周期阻滞于G_0/G_1期并诱导CNE1细胞的凋亡(P<0.05),其作用呈浓度依赖性。转录组测序结果表明，白花蛇舌草总黄酮处理后细胞中PERK信号通路变化显著。与对照组比较，白花蛇舌草总黄酮处理引起p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达显著升高(P<0.05)。与NC siRNA+白花蛇舌草总黄酮组比较，PERK siRNA组和PERK siRNA+白花蛇舌草总黄酮组细胞凋亡率、G_0/G_1期比例及p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达显著降低(P<0.05)。与白花蛇舌草总黄酮组比较，NAC+白花蛇舌草总黄酮组CNE1细胞ROS水平和p-PERK蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论：白花蛇舌草总黄酮诱导CNE1细胞周期阻滞和凋亡可能与其激活ROS调节的PERK信号通路有关。
关键词：白花蛇舌草总黄酮;;鼻咽癌;;内质网应激;;细胞凋亡;;细胞周期
基金资助：2023年度河南省中医药科学研究专项课题(2023ZYZD08);; 2022年度河南省中医药科学研究专项普通课题(2022ZY1075)
