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作者：沈锦涛;华茂奇;张北;朱云麒;王上增;
单位：河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院;河南中医药大学;
摘要：目的：探究养血柔筋方含药血清对Akt/Nrf2/GPX4信号通路的影响。方法：30只雄性Wistar大鼠分别连续灌胃给予低(9.18 g/kg)、中(18.36 g/kg)、高(36.72 g/kg)剂量养血柔筋方，2 w后收集血清。分离软骨细胞，(1)为研究铁死亡在IL-1β致软骨细胞死亡中的影响，在软骨细胞培养过程中分别加入50、100μmol/L的铁离子螯合剂；(2)为研究养血柔筋方含药血清在IL-1β诱导软骨细胞损伤中的作用，将所分离的细胞分为正常对照组、模型组及低、中、高剂量养血柔筋方含药血清组；(3)为研究Akt/Nrf2/GPX4信号在养血柔筋方含药血清改善软骨细胞铁死亡中的作用，培养过程中加入PI3K抑制剂(LY294002),分为正常对照组、模型组、养血柔筋方含药血清组、养血柔筋方含药血清+LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率；试剂盒检测Fe~(2+)、MDA水平；流式细胞术检测ROS水平；Western Blot检测GPX4、p-Akt、Nrf2蛋白表达；免疫荧光法检测GPX4、MMP-13、CollagenⅡ蛋白表达。结果：与正常对照组比较，模型组细胞存活率、GPX4、p-Akt、Nrf2、CollagenⅡ蛋白表达显著降低，Fe~(2+)、MDA、ROS水平及MMP-13蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较，铁离子螯合剂组细胞存活率显著升高，Fe~(2+)、MDA水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较，各剂量养血柔筋方含药血清组细胞存活率、GPX4、p-Akt、Nrf2、CollagenⅡ蛋白表达显著升高，Fe~(2+)、MDA、ROS水平及MMP-13蛋白表达显著降低(P<0.05)。与养血柔筋方含药血清组比较，养血柔筋方含药血清+LY294002组细胞存活率、GPX4、p-Akt、Nrf2、CollagenⅡ蛋白表达显著降低，MMP-13蛋白表达及MDA、Fe~(2+)水平显著升高(P<0.05)。结论：养血柔筋方含药血清可通过激活Akt/Nrf2/GPX4信号通路抑制膝骨关节炎软骨细胞铁死亡。
关键词：养血柔筋方含药血清;;膝骨关节炎;;铁死亡;;Akt/Nrf2/GPX4信号通路
基金资助：河南省体育局2023年体育课题研究项目(202301);; 河南省卫生健康委国家中医临床研究基地科研专项(2021JDZX2039);; 河南中医药大学2021年度“科研苗圃工程”项目(MP2020-9)
