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作者：杨彩云;鲁启文;罗桑;兰琴;熊燕;万强;
单位：江西中医药大学附属洪都中医院;江西中医药大学;江西中医药大学附属医院;
摘要：目的：探讨定心方含药血清对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞焦亡的干预作用及机制。方法：将巨噬细胞分为空白对照组、模型组、空白血清组及定心方含药血清低(2.5%)、中(5%)、高(10%)浓度组和定心方含药血清(中浓度)+ML385(Nrf2抑制剂，5μmol/L)组。CCK-8及流式细胞术检测细胞活力及凋亡，相应试剂盒检测细胞ROS、SOD、MDA及培养上清中LDH水平，Hoechst33342/PI双染检测细胞膜通透性，TUNEL染色观察巨噬细胞DNA断裂情况，ELISA检测细胞培养上清中IL-1β、IL-18水平，Western Blot检测细胞Keap1、Nrf2、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达。结果：与空白对照组比较，模型组细胞膜通透性升高，DNA断裂增多，细胞活力、SOD活性及Nrf2蛋白表达显著降低，细胞凋亡率及MDA、LDH、ROS、IL-1β、IL-18水平和Keap1、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较，定心方含药血清中、高浓度组细胞膜通透性降低，DNA断裂减少，细胞活力、SOD活性及Nrf2蛋白表达显著升高，细胞凋亡率及MDA、LDH、ROS、IL-1β、IL-18水平和Keap1、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。ML385可逆转定心方含药血清的作用(P<0.01)。结论：定心方含药血清可抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡，其机制与竞争性结合Keap1激活Keap1/Nrf2信号通路抑制炎症反应及氧化应激损伤有关。
关键词：定心方;;巨噬细胞焦亡;;Keap1/Nrf2通路;;炎症反应;;氧化应激
基金资助：国家自然科学基金项目(82374367);; 江西省自然科学基金项目(20232BAB206144);; 江西省中医药科研课题(2023A0104);; 江西中医药大学科技创新团队(CXTD22011);; 国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目(zyyzdxk-2023113);; 熊燕全国名老中医药专家传承工作室
