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作者：郝荣增;卢炳州;杨洋;毛玉涵;王姿逸;赵陇和;李亚军;茹毅;郑海学;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;
摘要：将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点，从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸（UAA）插入位点进行筛选，利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白，并通过生物正交点击化学反应引入荧光分子，观察细胞内的荧光标记蛋白；进一步通过间接免疫荧光试验验证荧光标记的蛋白。结果显示，成功筛选出VP1蛋白中UAA插入效率较高的氨基酸突变位点，并可以通过UAA控制VP1蛋白的表达。证实荧光分子染料DIBO-Alexa Fluor-488与VP1蛋白上的UAA发生点击化学反应可以进行活细胞染色，同时进行间接免疫荧光染色，可以观察到2种染色结果存在共定位趋势。本研究采用新方法实现了活细胞内FMDV VP1蛋白特异位点的荧光标记，为VP1蛋白功能研究和在细胞内示踪FMDV的感染及复制过程奠定了基础。
关键词：蛋白质标记;;口蹄疫病毒;;VP1蛋白;;点击化学;;非天然氨基酸
基金资助：国家自然科学基金项目（32372990）;; 甘肃省自然科学基金项目（22JR5RA030）
