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作者：李富祥;高华峰;赵文华;宋建领;
单位：云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室;
摘要：为建立睡眠嗜组织菌（Hi.somni）可视化LAMP检测方法，笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物，优化反应体系和反应程序，评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率，建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示，本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示，该方法能特异性地检测Hi.somni，与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应，特异性较强。敏感性试验结果显示，该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His，敏感性较高。临床样品检测结果显示，LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明，本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。
关键词：睡眠嗜组织菌;;环介等温扩增;;现场检测;;牛;;山羊;;绵羊
基金资助：云南省奶牛产业技术体系项目（2024KJTX-17）;; 云南省重大科技专项计划项目（202102AE090039,202302AE090010）
