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作者：李宇鹏;李运川;钱嘉莉;刘诗雨;谢景媛;宋旭;王祎;郭容利;范宝超;索朗斯珠;李彬;
单位：西藏农牧学院动物科学学院;江苏省农业科学院兽医研究所;
摘要：为研制针对PEDV S1蛋白单克隆抗体，为下一步应用研究奠定材料基础，本研究构建了表达三聚化形态的S1蛋白的重组质粒，利用HEK 293T细胞表达并纯化获得S1蛋白，经免疫小鼠后，制备并筛选分泌S1特异性单克隆抗体的杂交瘤B细胞，制备腹水后利用间接ELISA法测定了腹水效价及单抗的亚型；通过SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验分析制备抗体与病毒S蛋白的特异性结合能力。结果显示，成功表达和纯化三聚化PEDV重组S1蛋白，通过免疫制备筛选了15株特异性识别病毒S蛋白的单克隆抗体。15株单克隆抗体的重链为Ig G1型11株，Ig G2b型3株，32#抗体未检测到分型结果。除25#抗体未检测到轻链结构外，其余抗体轻链均为kappa链。Western-blot和间接免疫荧光分析表明制备抗体与病毒S蛋白特异性反应。功能域结合试验表明抗体20#、21#、31#与S1 D0区域反应，抗体9#、16#、25#与S1 NTD反应，抗体15#、27#、37#与S1 SD2反应，所制备抗体均无病毒中和活性。结果表明，本研究成功制备了多株可特异性识别PEDVS1蛋白的单克隆抗体，为病毒感染机制研究及免疫学诊断研究提供了重要的生物材料。
关键词：PEDV;;S1蛋白;;单克隆抗体;;抗原表位
基金资助：国家自然科学基金项目（32373030,32272996）;; 江苏省农业科技自主创新资金项目（CX(23)3076）;; 江苏省大型科学仪器开放共享自主研究课题（GX(23)2001）;; 西藏牦牛和藏猪重要病毒性腹泻疫病的防控技术研究（XZ202401ZY0025）;; 西藏农牧学院2024年重点学科建设项目（XK2024-02）
