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作者：李玲霞;张旭辉;令小东;韩生义;吴锦艳;尚佑军;
单位：青海大学农牧学院;青海大学畜牧兽医科学院;中国农业科学院兰州兽医研究所;
摘要：旨在利用慢病毒载体构建一种稳定表达小反刍兽疫病毒（PPRV）N蛋白的THP-1细胞系，并验证该细胞系在PPRV激活炎症反应中的作用。首先采用PCR技术扩增N基因，进而构建慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro-N。随后将该载体与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共同转染至HEK293T细胞，通过包装获得表达N蛋白的慢病毒。接着将慢病毒感染THP-1细胞，再使用嘌呤霉素筛选，之后利用细胞有限稀释法得到稳定表达N蛋白的THP-1细胞系，最后采用ELISA和Western-blot检测该细胞系对PPRV激活炎症反应的影响。结果表明，成功构建了THP-1-N细胞系，不仅该细胞系活力较好，而且具备稳定传代的能力。且稳定表达N蛋白的THP-1细胞可显著促进由PPRV感染所诱导的IL-1β表达，进而激活炎症反应。综上所述，成功建立了一种能够稳定表达N蛋白的THP-1细胞系，为PPRV感染及致病机制研究提供了重要的生物材料。
关键词：小反刍兽疫病毒;;N蛋白;;慢病毒;;细胞系;;炎症小体
基金资助：2024年度宁夏回族自治区重点研发计划项目（2024BBF02021）;; 省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室自主课题（2024-ZZ-05）
