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作者：牛栋玉;张念章;李文卉;刘垠鞠;秦洪涛;张永芝;殷宏;付宝权;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：为了研究旋毛虫乳酸脱氢酶（TsLDH）的反应原性及组织分布特点，从GenBank中获取TsLDH基因序列进行生物信息学分析，设计引物对其进行RT-PCR扩增，将PCR产物连接到pET-30a质粒构建重组表达质粒p ET30a-TsLDH，转化大肠杆菌BL21(DE3）中进行表达。将重组蛋白rTsLDH纯化后，通过Western-blot进行反应原性分析，与弗氏佐剂混合免疫家兔，采血分离血清，用间接ELISA方法检测家兔抗rTsLDH多克隆抗体效价。并利用纯化后的家兔抗rTsLDH抗体对TsLDH进行组织定位。经优化后在37℃，200 r/min,1 mmol/L IPTG诱导条件下成功表达重组蛋白rTsLDH，其分子质量约为39.4 k Da，且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明重组蛋白rTsLDH可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有反应原性。多克隆抗体效价为1∶5.12×10~5。组织定位结果显示，TsLDH存在于旋毛虫3个发育时期的体表及杆状体中，且在成虫时期可分泌到宿主肠组织周围，但不能分泌到感染的肌肉组织中。结果表明rTsLDH具有良好的反应原性，且TsLDH存在于虫体的各个时期，为旋毛虫病诊断候选抗原及药物靶标筛选提供了依据。
关键词：旋毛虫;;乳酸脱氢酶;;反应原性;;免疫组化定位
基金资助：国家重点研发计划项目（2023YFD1801000）;; 西藏自治区科技计划项目（QYXTZX-RKZ2024-03-3）;; 兰州市青年科技人才创新项目（2023-QN-21）
