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作者：孙瑜嘉;殷娟斌;刘瀛;李可卿;曹轶梅;朵红;卢曾军;赵志荀;张强;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;青海大学畜牧兽医科学院;
摘要：本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构成Nup155基因缺失的PK-15细胞株，并检测敲除Nup155基因后对PK-15细胞的影响。首先设计精确靶向Nup155基因的4条sg RNA，与载体LentiCRISPR v2连接后进行慢病毒包装；再使用2μg/m L嘌呤霉素筛选细胞株；通过RT-qPCR和Western-blot来确认细胞中Nup155基因是否被敲除；最终通过CCK8试验检测Nup155基因敲除对PK-15细胞活性的影响。RT-qPCR及Westernblot结果显示，细胞株Nup155基因的m RNA和蛋白表达水平显著降低；CCK8试验结果显示，部分敲除Nup155基因的PK-15细胞活力下降。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了1株Nup155基因部分敲除的PK-15细胞系，并发现部分敲除Nup155基因会显著影响PK-15细胞活力，为深入研究Nup155基因的功能机制提供了理想的细胞模型。
关键词：PK-15细胞;;基因敲除;;Nup155;;慢病毒包装
基金资助：国家自然科学基金项目（32372988）;; 国家重点研发计划项目(2021YFD1800300）;; 青海省重点研发与转化计划项目（2022-QY-207）
