来源：期刊VIP网 时间：
作者：洪照微;王萌;孙黎秀;寇永杰;马志雅;江新成;付宝权;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;湖南农业大学动物医学院;山西农业大学动物医学院;江西农业大学动物科学技术学院;
摘要：为探究弓形虫中TGME49＿240850基因编码的含WD40结构域蛋白的生物学功能，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建弓形虫TGME49＿240850条件性敲除虫株（TGME49＿240850-m AID-6HA），并分析该基因在弓形虫Pru-TIR1虫株的亚细胞定位和基本生物学功能。间接免疫荧光试验显示，TGME49＿240850蛋白定位于细胞核，并且加入吲哚乙酸后能将该蛋白降解；Western-blot结果表明，TGME49＿240850-m AID-6HA融合蛋白大小约为90 k Da；与对照组相比，TGME49＿240850-m AID-6HA虫株形成噬斑的能力（P<0.001）和增殖能力（P<0.01）均显著降低，而对入侵、逸出和缓殖子转化能力却无明显影响（P>0.05）。以上结果表明，TGME49＿240850蛋白的降解减弱了弓形虫的体外增殖能力。结论：成功构建了TGME49＿240850条件性敲除虫株，为进一步研究弓形虫中含WD40结构域相关蛋白的功能奠定基础。
关键词：弓形虫;;WD40结构域;;条件性敲除;;生长素诱导降解系统
基金资助：国家重点研发计划项目（2023YFD1801000）;; 甘肃省自然科学基金项目（23JRRA553）;; 西藏自治区科技计划项目（QYXTZX-RKZ2024-03-3）
