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作者：向祝;徐莹;刘意;赵格;高玉斌;刘俊辉;张喜悦;王君玮;
单位：中国动物卫生与流行病学中心农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方);中国海洋大学食品科学与工程学院;
摘要：为了获得接近于天然的抗原蛋白，根据GenBank公布的链球菌溶血素O(streptolysin O,SLO)基因序列合成SLO基因并克隆于真核载体pPICZαA，构建pPICZαA-SLO重组质粒。经酶切和测序鉴定后，将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，通过PCR鉴定和基因测序构建正确的毕赤酵母表达菌株，并用Ni-NTA亲和层析技术纯化后，对重组蛋白进行鉴定。结果显示，成功构建毕赤酵母表达菌株Pichia sp GS115 (pPICZαA-SLO)，经SDS-PAGE、Western-blot鉴定，检测到相对分子质量为65 k Da的目的蛋白，表明SLO在毕赤酵母中成功表达并纯化，为SLO蛋白的工业化生产奠定了基础。
关键词：链球菌溶血素O;;真核表达;;蛋白表达;;纯化
基金资助：国家重点研发计划项目（2022YFC2303900,2022YFD1301003）;; 中国动物卫生与流行病学中心创新基金项目（DW2021001-13）
