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作者：席韬;罗俊聪;朱昱茜;林永玉;陈婕;张帆;石鑫泰;何印娣;李帅鹏;徐继英;田宏;郑海学;
单位：西北民族大学生命科学与工程学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;
摘要：以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了p ET-28a-BP26和p MAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆菌表达蛋白，亲和层析纯化目的蛋白。采用Western-blot方法分析目的蛋白反应活性，以His-BP26作为包被抗原，HRP标记的MBP-BP26作为检测抗原，经过优化，建立了一种双抗原夹心ELISA方法。结果显示，根据统计学分析，双抗原夹心ELISA临界值为0.35；经检验，该方法与口蹄疫病毒-O型、牛结节皮肤病病毒、牛传染性腹泻病毒的抗体阳性血清以及赤羽病病毒多抗均无交叉反应，敏感性可达1∶640；批间及批内变异系数均小于10%。用该方法对40份已知虎红平板凝集试验检测背景的羊血清进行检测，结果检出8份阳性，32份阴性。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好，可区分BP26基因缺失疫苗免疫，用于布鲁氏菌病的血清学调查和临床诊断。
关键词：布鲁氏菌;;BP26;;原核表达;;双抗原夹心ELISA
基金资助：家畜重要疫病感染与免疫防控的基础理论研究（22ZD6NA001）;; 中央高校基本科研业务费专项资金资助（学科交叉创新团队建设项目）（lzujbky-2022-ct02）;; 中国农业科学院创新计划项目（CAAS-CSLPDCP-2023002）;; 国家生猪技术创新中心项目（NCTIP-XD/C03）;; 家畜重要疫病诊断研制与产业化项目（22ZD6NA012）;; 农业技术产业体系建设项目（CARS-35）;; “十四五”广东省揭榜挂帅项目（2023SDZG02）;; 第三批甘肃省拔尖领军人
