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作者：宋国栋;葛家振;Weldeab Solomon;刘一健;高鹏程;王梓晴;郭双双;谢莹影;储岳峰;郑福英;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;新疆农业大学动物医学学院;华南农业大学兽医学院;
摘要：旨在使用布鲁菌脂多糖（LPS)和HRP标记的单克隆抗体（HRP-m Ab）建立阻断ELISA抗体检测方法，并评价其检测性能以及初步应用。结果显示，当布鲁菌LPS的包被量为400 ng/孔，10 g/L阿拉伯树胶溶液封闭2 h，血清稀释4倍后37℃孵育20 min，稀释度为1∶6 000的HRP-m Ab 37℃孵育20 min，显色10min时为最佳反应条件，该方法的临界值为PI=46.7%。该方法的最低检测水平为3.125 IU/m L，与常见的细菌病阳性血清无交叉反应，批内和批间变异系数均小于10%，具有良好的敏感性、特异性和重复性。该方法可检测牛、羊、鹿、犬等宿主的布鲁菌阳性血清。使用建立的阻断ELISA方法检测284份临床血清，与虎红凝集试验、竞争ELISA和间接ELISA试剂盒的符合率分别达到97.18%(276/284)、98.59%(280/284)和96.13%(273/284)。结果表明，建立了敏感性高、特异性好、重复性好的布鲁菌抗体阻断ELISA检测方法，全部反应过程不超过1 h，并且可检测多物种布鲁菌阳性血清。该方法弥补了我国布鲁菌抗体阻断ELISA检测技术的空白，为布鲁菌病的快速诊断以及免疫水平监测提供了技术支持。
关键词：布鲁菌;;脂多糖;;单克隆抗体;;阻断ELISA
基金资助：甘肃省科技重大专项(23ZDNA007);; 中国农业科学院重大科技任务项目(CAAS-ZDRW-202410);; 甘肃省农业农村厅农业科技支撑项目(KJZC-2024-13)
