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作者：钟匀汝;张雨;宋昱庆;户鑫兵;田占成;关贵全;罗建勋;艾军;何俊峰;殷宏;独军政;
单位：甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;昆明海关技术中心;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;
摘要：流行性出血病是由流行性出血病病毒（EHDV）经库蠓叮咬传播感染牛、羊、鹿等反刍动物的非接触性传染病，EHDV VP7蛋白是该病诊断的靶标蛋白。本研究参照GenBank中已发表的基因序列经密码子优化后人工合成EHDV VP7基因，将该基因克隆至表达质粒pET-28a，构建重组质粒pET-EHDV VP7，将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，以IPTG诱导表达且优化表达条件，通过Ni-NTA亲和层析法对表达的VP7蛋白进行纯化并用不同浓度咪唑透析复性，用复性后的VP7蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备抗VP7蛋白单克隆抗体。通过间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹和细胞免疫荧光试验验证单克隆抗体的特异性。结果显示，利用大肠杆菌表达系统成功表达重组EHDV VP7蛋白，纯化后制备了2株稳定分泌针对EHDV VP7蛋白的单克隆抗体，分别命名为1D10和3C11，这2株单克隆抗体不仅能与大肠杆菌表达的重组EHDV VP7蛋白反应，而且也能与真核细胞表达的重组EHDV VP7蛋白结合，同时这2株单克隆抗体与重组蓝舌病毒VP7蛋白和重组非洲马瘟病毒VP7蛋白不发生反应。本研究成功表达和纯化出了重组EHDV VP7蛋白，制备了特异性抗VP7蛋白单克隆抗体，这为研究EHDV VP7蛋白的结构功能以及诊断方法的建立奠定了基础。
关键词：流行性出血病病毒;;VP7蛋白;;蛋白表达与纯化;;单克隆抗体
基金资助：国家重点研发计划项目(2021YFD1800500,2024YFD1800100);; 甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024);; 甘肃省科技厅项目(22CX8NA011);; 国家肉牛牦牛产业技术体系专项(CARS-37);; 中国农业科学院科技创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI)
