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作者：赵佳慧;马祎芳;李学瑞;高鹏程;狄娜;郑福英;储岳峰;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;
摘要：为检测产气荚膜梭菌（Cp）β_2毒素抗体，合成产气荚膜梭菌β_2毒素基因并插入pET-32a载体，诱导表达后得到Cp β_2毒素重组蛋白，以纯化的Cp β_2毒素重组蛋白为包被抗原，Cp β_2毒素单抗2A4为竞争性抗体与绵羊血清竞争性反应，HRP-山羊抗鼠Ig G为二抗，建立并优化Cp β_2毒素抗体的竞争ELISA检测方法。结果显示，蛋白包被浓度为1.5μg/m L，待检血清不稀释，二抗1∶20 000稀释，避光显色15 min为最优反应条件。所建方法的阴性临界值为31.44%，阳性临界值为37.65%，检测阳性血清敏感度为1∶64，批间、批内试验变异系数均小于10%。与Cp的α、β_1、ε毒素，腐败梭菌以及大肠杆菌阳性血清均无非特异性反应。检测200份临床绵羊血清样品，该竞争ELISA方法与间接ELISA方法的阳性符合率为85.7%，阴性符合率为95.9%，总符合率为92%。检测100份牛血清，符合率为100%。结果表明，本试验所建方法具有良好的重复性、特异性和敏感性，可以用于检测动物体内是否存在针对Cp β_2毒素的抗体，为评估动物是否感染Cp提供了有效手段，并在Cp的流行病学调查及疫苗免疫效果评价中具有广阔的应用前景。
关键词：产气荚膜梭菌;;β_2重组蛋白;;单克隆抗体;;竞争ELISA;;抗体检测
基金资助：国家重点研发子课题:羊梭菌三联四防基因工程亚单位疫苗研发(2023YFD1802504-04);; 兰州市科技计划项目(2023-1-14);; 中国农业科学院创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI)
