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作者：包燕玲;宋昱庆;户鑫兵;张格林;田占成;关贵全;罗建勋;苟惠天;殷宏;独军政;
单位：甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;
摘要：旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析。经优化表达条件获得分子质量约为19 k Da的可溶性重组A27L蛋白。采用High Affinity Ni-Charged Resin FF对可溶性表达产物进行纯化，成功获得高纯度的重组A27L蛋白，将其免疫新西兰大白兔4次后收集血清，Western-blot分析和间接免疫荧光鉴定结果表明A27L多克隆抗体可特异识别BHK-21细胞中表达的重组A27L蛋白。本研究利用大肠杆菌成功表达了可溶性重组LSDV A27L蛋白，并制备出特异的A27L多克隆抗体，为深入研究A27L蛋白的生物学功能以及研发结节性皮肤病疫苗和诊断技术奠定了基础。
关键词：结节性皮肤病病毒;;A27L蛋白;;可溶性表达;;多克隆抗体
基金资助：国家重点研发计划项目(2021YFD1800500,2024YFD1800100);; 甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024);; 甘肃省科技厅项目(22CX8NA011);; 国家肉牛牦牛产业技术体系专项(CARS-37);; 中国农业科学院科技创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI)
