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作者：周外平;丁得方;华雷;李梦杰;李喜霞;陈思宇;
单位：武汉市第四医院;
摘要：目的 研究酸敏感离子通道(ASIC)1a对帕金森细胞炎症反应的作用机制。方法 500μmol/L MPP~+碘化物诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)建立帕金森病模型，根据ASIC1a基因序列设计siRNA和阴性对照(si-neg)。实验分为对照组、模型组、siRNA组、si-neg(阴性对照)组。细胞计数试剂盒(CCK)8法检测MPP~+碘化物对SH-SY5Y细胞存活率的影响；免疫荧光检测ASIC1a、多巴胺转运体(DAT)表达；实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染效率、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切后的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-Caspase)-3 mRNA水平；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8水平；Western印迹检测ASIC1a、p65、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2及磷酸化蛋白表达。结果 500μmol/L MPP~+碘化物抑制SH-SY5Y细胞增殖，激活ASIC1a,减少DAT荧光强度，Bax、cleaved-Caspase-3 mRNA表达增加，Bcl-2 mRNA表达减少，增加TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平，并且抑制p65、ERK1/2蛋白磷酸化水平差异均显著(P<0.05);沉默ASIC1a后，在帕金森细胞中，ASIC1a mRNA表达显著降低，ASIC1a荧光强度显著降低，DAT荧光强度显著增加，Bax、cleaved-Caspase-3 mRNA表达显著增加，Bcl-2 mRNA表达显著降低，TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平明显增加，p65、ERK1/2蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.001)。结论 沉默ASIC1a能够促进帕金森病模型细胞炎症反应和凋亡，其作用机理与降低p65、ERK1/2磷酸化有关。
关键词：帕金森病;;酸敏感离子通道(ASIC)1a;;SH-SY5Y细胞;;炎症
基金资助：武汉市卫生计生委科研项目(WX18Q04)
