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作者：傅宇飞;李传峰;田传龙;李泽贤;麦嘉迅;程松;刘禹含;孟春春;朱杰;程国锋;刘光清;
单位：江苏科技大学生物技术学院;中国农业科学院上海兽医研究所;上海牧爱宠物用品有限公司;广州市海珠区立德动物医院;德国纳博科临动物临床中国检验实验室;同济大学;
摘要：根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物，通过对反应体系和扩增程序的优化，建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法，评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示，该方法最佳退火温度为60 ℃，引物浓度分别为CCoV 1.0 μmol/L和CPV 0.1 μmol/L，检测下限均为10~2 copies/μL。批内与批间的变异系数均小于2%。该方法用于检测犬腺病毒(CAV)、犬圆环病毒(CaCV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬流感病毒(CIV)、犬副流感病毒(CPIV)均无特异性扩增。对68份临床样品的检测，结果表明CCoV阳性率为22.0%，CPV阳性率为61.8%，与普通PCR检测结果相比，本研究建立的方法更加灵敏。本研究建立的CCoV和CPV检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点，可用于对CCoV和CPV的鉴别诊断。
关键词：犬冠状病毒;;犬细小病毒;;双重荧光定量PCR;;鉴别诊断
基金资助：国家自然科学基金项目(32000109);; 上海市青年科技英才扬帆计划项目(20YF1457700);; 上海市自然科学基金项目(22ZR1476300)
