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作者：李雪雯;李婷婷;李长尧;焦爽;郑君;荣俊;翁长江;
单位：长江大学生命科学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省兽医免疫学重点实验室;
摘要：本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV)E184L蛋白(pE184L)，并制备单克隆抗体(mAb)，为其功能研究提供物质基础。首先，构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白，使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化，用纯化后的蛋白对小鼠进行免疫，随后取阳性小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合，经间接ELISA方法筛选出能稳定分泌pE184L mAb的杂交瘤细胞。Western blot结果显示，该抗体能够特异性识别过表达的外源pE184蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)表达的内源pE184蛋白。IFA结果表明该株mAb能特异性标记过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。Co-IP试验结果表明该株mAb能特异性结合过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。本研究成功表达并纯化了可溶性E184L蛋白，并制备了1株pE184L mAb，该mAb与pE184L蛋白具有良好的反应性，这为ASFV pE184L的生物学功能研究奠定了基础。
关键词：ASFV;;E184L;;原核表达;;单克隆抗体
